조직 슬라이드 제작 및 조직 H&E 염색 결과 레포트(A+)

소개

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목차

1. Material

2. Method
1) 조직 슬라이드 제작
2) 파라핀 제거와 탈수
3) IHC&Counter staining

3. Result

4.고찰

본문내용

Material
조직절편기, tissue bath, 파라핀, 물, 에탄올, 오븐, 자일렌, 1XPBS, 1% H2O2용액, 슬라이드, mounting soultion, 5% BSA 용액, hydrophobic pencil

Method
1)조직 슬라이드 제작
-파라핀 블록을 절편기에 고정해서 5μm으로 절단한다
-잘린 조직을 bath에 띄워서 슬라이스에 올린다.
-조직 단백질 염색을 위해서 파라핀은 60도 오븐에 넣고 녹여 제거한다

2)파라핀 제거와 탈수
-자일렌을 각 5분마다 세 번 씻는다
-100%, 95%, 70%. 50% 에탄올에 차례로 넣고 각 10분 마다 두 번 씻는다.
-물로 5분마다 두 번 씻는다.

3)IHC&Counter staining
-빛을 차단하고 조직슬라이드를 1% H2O2 용액에 10분동안 넣어준다
-슬라이드를 기울인 상태로 1X PBS를 흘려보내준다. 이때 조직에 직접적으로 하지 않도록 조심한다
-hydrophobic pencil을 이용하여 조직 주변 슬라이드에 영역을 구분해준다.
-5% BSA 용액으로 30분동안 blocking을 한 뒤에 씻어낸다.
-1차 항체 용액을 떨어뜨리고 RT에서 2시간동안 반응한 후 씻어낸다.
-2차항체를 떨어뜨리고 한시간동안 반응한 뒤 씻어낸다.
-ABC 복합체 반응 후 씻어낸다.
-DAB 반응 후 씻어낸다.
-mounting solution을 사용하여 sealing을 한다.

4. Result

먼저, 저배율로 각 기관이 어디인지 판단해야한다.
간은 상피가 없고 큰 구멍이 나타난다. 이는 간세동이다. 이 두 가지 특징으로 인해 간이라는 것을 알 수 있고, 이후 확대해서 보면 하얀부분이 있는데 이것이 간문맥으로 추측된다.
신장역시 상피가 없고 세로로 기다란 게 보인다. 이는 tubule 때문이다. 동그랗게 사구체가 있는 것을 확인할 수 있는데 이것이 사구체가 아닐까 추측한다.

참고자료

· 김의사박사/쌩초보를 위한 병리학 가이드;2020; 조직학각론
· https://blog.naver.com/dlfpomd/221517897841
· Wahid, Ahmed & Hamed, Ashraf & Eltahir, Heba & Abouzied, Mekky. (2016). Hepatoprotective activity of ethanolic extract of Salix subserrata against CCl4- induced chronic hepatotoxicity in rats. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16. 1-10.
· 최진성, 이지윤, 정춘식, 정이숙, 이호영, 이은영, 이유미, 이선미, 이명구, 이금화, 이경림. Robbins and Cotran Pathologic basis of disease.
· Hsu SM, et al. The use of avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques. A comparison between ABC and unlabeled antibody PAP procedures. J Histochem Cytochem 1981;29:577-580.
· Mepham BL, Frater W, Mitchell BS. The use of proteolytic enzymes to improve immunoglobulin staining by the PAP technique. Histochem J 1979;11:345-349
· Frost AR, Sparks D, Grizzle WE. Methods of antigen recovery vary in their usefulness in unmasking specific antigens in immunohistochemistry Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology 2000;8:236-243
· https://blog.naver.com/benemune/222284529524
· https://blog.naver.com/one_winterday/222684796086