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대장균 배양, 형질전환, Plasmid DNA 분리, DNA 전기영동 실험 보고서2025.01.121. 대장균(E.coli) 대장균(E.coli)은 그람음성 간균으로, 포자를 생성하지 않으며 1-2 microns x 30-30 micron 크기의 박테리아입니다. 섭씨 37도에서 잘 자라며, 정상적인 인간의 장에 존재하여 건강에 유익합니다. 하지만 배설물과 함께 나와 질병을 일으킬 수 있습니다. 2. 배지 배지는 미생물이나 세포를 성장시키는데 사용됩니다. 가장 일반적인 배지는 액체 영양배지나 LB배지이며, 이를 Agar와 섞어 고체배지로 사용할 수 있습니다. 이번 실험에서 사용한 LB배지는 tryptone, yeast extrac...2025.01.12
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대장균 계대배양-선상 도말 평판 배양법과 gram staining2025.01.031. 대장균 계대배양 대장균의 세포증식을 위해 계대배양을 수행하였습니다. 배양된 대장균 S. aureus와 E. coli 중에서 colony 하나를 백금이의 loop 부분으로 떠서 LB agar plate에 4차 tracking 방법으로 도말하였습니다. 이후 37°C에서 over night 배양하여 균을 증식시켰습니다. 2. Gram staining 슬라이드 글라스에 멸균 증류수 한 방울을 떨어뜨리고, 배양된 E. coli와 S. aureus를 백금이의 loop 부분으로 떠서 슬라이드 위의 물방울과 잘 섞어 얇게 도말하였습니다. 이...2025.01.03
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대장균 배양과 형질전환, 플라스미드 DNA 분리 및 전기영동2025.11.171. 대장균 배양 및 형질전환 대장균(Escherichia coli)은 유전공학 연구에 가장 널리 사용되는 박테리아로, 약 2μm 길이에 0.8μm 폭의 크기를 가지며 약 460만 개의 염기쌍으로 이루어져 있다. 형질전환은 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어 새로운 유전형질을 얻게 하는 과정이다. 본 실험에서는 Competent cell에 플라스미드 DNA를 도입하기 위해 열 충격 방법을 사용했으며, 45℃에서 1분간 열충격을 주어 세포막을 불안정하게 해 플라스미드가 세포 내로 들어갈 수 있도록 했다. 형질전환된 세포는 항생제 저항성...2025.11.17
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식품미생물학 실험 보고서 배지제조 및 대장균접종 (A+보고서)2025.01.041. 무균조작 실험을 진행할 때 외부 미생물의 유입을 막기 위해 무균 조작 방법을 익히는 것이 중요합니다. 멸균된 표면과 기구를 사용하고, 공기 노출을 최소화하며, 작업자도 장갑을 착용하는 등의 방법으로 무균 환경을 유지해야 합니다. 이를 통해 실험 미생물 외의 오염을 방지하고 순수 배양물을 분리 및 유지할 수 있습니다. 2. 배지 제조 및 살균 배지 제조 시 정량의 배지 가루와 증류수, agar를 섞어 준 뒤 고압 살균기나 여과 방식으로 살균합니다. 고압 살균기는 100°C 이상의 온도와 압력을 이용하여 배지와 기구를 살균하며, ...2025.01.04
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분자생물학 실험 (A+) Bacterial Cell culture 결과보고서2025.01.041. 세포 배양 이 보고서는 세포 배양 실험 결과를 다루고 있습니다. 세포 배양은 살아있는 세포를 실험실 환경에서 증식시키는 기술로, 생물학 및 의학 연구에 널리 사용됩니다. 이 실험에서는 대장균 세포를 배양하여 성장 곡선, 배양액 pH 변화 등을 관찰하고 분석했습니다. 세포 배양 기술은 질병 치료제 개발, 유전자 조작, 조직 공학 등 다양한 분야에 활용되고 있습니다. 2. 대장균 배양 이 보고서는 대장균 세포를 배양하여 실험을 진행했습니다. 대장균은 대표적인 박테리아로, 유전자 조작 및 단백질 생산 등의 연구에 널리 사용됩니다. ...2025.01.04
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세균 도말 실험: Streaking & Spreading 기법2025.11.181. Streaking 기법 세균이 혼합된 시료로부터 단일 콜로니를 순수 분리하는 방법입니다. 알코올 램프로 살균한 루프를 이용하여 평판배지에 세균을 도말한 후, 루프를 재살균하고 이전 도말 부분의 끝에서 새로운 부분으로 도말하는 과정을 반복합니다. 이를 통해 도말 순서에 따라 콜로니 개수가 감소하며, 최종적으로 단일 콜로니를 얻을 수 있습니다. 이 기법은 계대 배양을 위한 순수 분리에 필수적입니다. 2. Spreading 기법 생균 수를 측정하기 위해 사용되는 방법으로, 희석된 세균 배양액을 평판배지에 접종한 후 멸균된 삼각봉으로...2025.11.18
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대장균의 개체군 성장 분석 실험2025.11.131. 개체군 성장곡선의 4단계 개체군의 성장은 4가지 단계로 구분된다. Lag phase는 새로운 환경에 적응하는 시기로 세포가 효소와 단백질을 합성한다. Exponential phase는 세포 수가 기하급수적으로 증가하며 활성이 가장 높은 시기이다. Stationary phase는 개체 증가 수와 감소 수가 균형을 이루어 개체 수 변화가 관찰되지 않는 상태이다. Dead phase는 환경적 요인으로 인해 개체 수가 줄어드는 단계이다. 2. 대장균의 배가시간(Doubling time) 측정 Exponential growth peri...2025.11.13
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대장균 형질전환을 위한 Competent Cell 제조2025.11.141. Competent Cell 제조 낮은 온도에서 세포막 인지질의 유동성을 감소시키고, 염화칼슘으로 세포막의 음전하를 감소시켜 competent cell을 제조한다. 제조된 competent cell은 글리세롤에 현탁시켜 cell stock으로 보관된다. Competent cell은 외부 DNA 삽입이 용이하도록 화학적으로 처리된 대장균 세포로, 형질전환에 필요한 수용성 세포이다. 2. 형질전환 및 대장균 사용 이유 형질전환은 외부 DNA를 세포 내에 삽입하여 세포의 형질을 변환시키는 유전자 재조합 방법이다. 대장균을 사용하는 이...2025.11.14
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반응능 세포(Competent Cell) 제조 실험2025.11.171. 유전자 재조합 기술 특정 유전자가 클로닝된 재조합 플라스미드 DNA를 세포 내에 도입하여 특정 유전자를 다량 확보하거나 발현시켜 원래의 생명체가 만들지 않는 특정 단백질을 생산하는 기법입니다. 표적 DNA를 공여 세포로부터 분리한 후 제한효소로 절단하고, 벡터 DNA와 연결하여 재조합 DNA를 만든 후 숙주세포에 도입하여 형질전환시키는 과정으로 진행됩니다. 2. 반응능 세포(Competent Cell) 유전자 도입에 사용되는 숙주세포로, 외부의 DNA를 받아들일 수 있도록 인위적으로 만들어진 세포입니다. 대장균이 가장 널리 사...2025.11.17
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플라스미드 DNA 정제 실험 예비레포트2025.11.171. 플라스미드 DNA 정제 박테리아 세포로부터 플라스미드 DNA를 정제하는 것은 유전자 재조합 실험의 기본 과정이다. 플라스미드 DNA는 세균의 유전체 DNA에 비해 매우 작고, 유전체 DNA는 선형이 되는 반면 플라스미드 DNA는 원형의 CCC(공유결합 닫힌 원형) 구조를 가진다는 차이점을 이용하여 정제한다. 1979년 번보임과 돌리 등이 개발한 알칼리 세포용해법이 현재 널리 사용되고 있다. 2. 알칼리 세포용해법 알칼리 세포용해법은 3단계로 구분된다. 첫째, 대장균 세포를 완충액에서 안정화시킨다. 둘째, 알칼리와 SDS 용액을...2025.11.17
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