소개글
"생세포 cell counting"에 대한 내용입니다.
목차
1. 세포 계수 및 배양
1.1. 세포 계수
1.1.1. 혈구계산기(Hemocytometer)의 구조와 원리
1.1.2. 세포 계수 방법
1.1.3. Trypan blue를 이용한 세포 염색
1.2. 세포 배양
1.2.1. 세포 배양의 기본 개념
1.2.2. 세포 성장 및 증식 단계
1.2.3. 계대 배양(Cell Passage)
1.2.4. 배지 선택 및 조성
1.3. 실험 재료 및 방법
1.3.1. 세포 채취 및 희석
1.3.2. 세포 수 계산
1.3.3. 세포 시딩 및 배양
1.4. 실험 결과 및 고찰
1.4.1. 세포 수 계산 결과
1.4.2. 세포 시딩 결과
2. 참고 문헌
본문내용
1. 세포 계수 및 배양
1.1. 세포 계수
1.1.1. 혈구계산기(Hemocytometer)의 구조와 원리
혈구계산기(Hemocytometer)는 세포 수를 정량화하는 데 사용되는 장치이다. 혈구계산기는 정사각형 모양의 격자 구조로 되어 있으며, 이 격자 구조에 세포 현탁액을 주입하여 현미경으로 세포를 관찰하고 계수할 수 있다.
혈구계산기의 구조는 다음과 같다. 혈구계산기에는 두 개의 챔버가 있으며, 각 챔버는 9개의 큰 정사각형 영역으로 구성된다. 이 9개의 큰 정사각형 영역은 다시 16개의 작은 정사각형 영역으로 나누어진다. 각 작은 정사각형 영역의 부피는 0.1 mm x 0.1 mm x 0.1 mm = 0.001 mm3이다.
혈구계산기의 원리는 다음과 같다. 세포 현탁액을 혈구계산기의 샘플 도입구에 주입하면, 모세관 현상에 의해 챔버 내부로 액체가 흡수된다. 이때 챔버와 커버글라스 사이의 공간이 일정하게 유지되므로, 일정 체적의 세포 현탁액이 챔버 내부에 포함된다. 이 세포 현탁액 내의 세포를 현미경으로 관찰하고 계수함으로써 세포 밀도를 계산할 수 있다.
1.1.2. 세포 계수 방법
세포 계수 방법은 세포 배양, 생명과학 실험, 그리고 임상검사 등 다양한 분야에서 중요하게 활용되는 기술이다. 세포 계수 방법 중 가장 널리 사용되는 방법은 혈구계산기(hemocytometer)를 이용하는 것이다.
혈구계산기는 정확하고 재현성 있는 세포 수 측정을 가능하게 해준다. 이 기기는 정립되어 있는 체적의 공간을 갖고 있어, 세포 현탁액을 일정한 부피로 채워 넣고 현미경으로 세포를 관찰하면 세포의 농도를 정량적으로 계산할 수 있다. 일반적으로 혈구계산기의 공간은 0.1mm 높이의 격자 모양으로 되어 있어, 세포 현탁액을 채웠을 때 정량화가 용이하다. 이렇게 계산된 세포 농도를 바탕으로 원하는 농도로 희석하거나 배양할 수 있다.
세포 계수 방법의 구체적인 과정은 다음과 같다. 우선 세포 현탁액을 혈구계산기의 홈에 넣고, 현미경으로 관찰한다. 그 후 미리 정해진 규칙에 따라 세포를 계수한다. 예를 들어, 혈구계산기의 모눈 중에서 5개의 구역을 선택하여 각 구역의 세포 수를 세고, 이를 평균한 값을 이용하여 최종 세포 농도를 계산한다. 이때 세포가 모눈의 경계선에 걸쳐 있는 경우, 일정한 기준(예: 경계선의 오른쪽과 아래쪽에 위치한 세포만 계수)에 따라 세포를 계수한다. 이러한 과정을 거쳐 최종적으로 계산된 세포 농도를 바탕으로 필요한 농도로 희석하거나 배양할 수 있다.
이와 같이 혈구계산기를 이용한 세포 계수 방법은 세포 배양 및 실험에 필수적인 기술로, 정확하고 재현성 있는 세포 수 측정을 가능하게 한다. 이를 통해 실험의 신뢰성과 효율성을 높일 수 있다.
1.1.3. Trypan blue를 이용한 세포 염색
Trypan blue를 이용한 세포 염색은 세포의 생사를 구분하기 위해 사용되는 방법이다. Trypan blue는 짙은 청색의 생체 염색용 색소로, 세포막에 손상이 있는 죽은 세포에는 빠르게 침투하여 푸르게 염색되지만, 건전한 세포막을 가진 살아있는 세포에는 침투하지 않는다. 따라서 현미경으로 관찰하면 죽은 세포만 푸르게 염색되어 구별할 수 있다.
Trypan blue 염색은 정확한 세포 수 계산을 위해 사용되는데, 세포의 생사 구분을 통해 살아있는 세포만을 계수할 수 있기 때문이다. 죽은 세포까지 계수하면 실제 세포 수보다 과대 추정될 수 있기 때문에 Trypan blue 염색을 통해 이를 방지할 수 있다. 또한 세포 수가 적절히 희석된 경우에 더욱 정확한 계수가 가능하다.
다만 Trypan blue 염색 시간이 너무 길면 살아있는 세포까지 염색될 수 있고, 반대로 시간이...
참고 자료
Google search, “hemocytometer”, 2020.05,
https://en.wikipedia.org/wiki/Hemocytometer
ThermoFisher SCIENTIFIC, “Counting Cells in a Hemocytometer”, 2020.05,
https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/references/gibco-cell-culture-basics/cell-culture-protocols/counting-cells-in-a-hemacytometer.html
Cell Signaling TECHNOLOGY, “RIPA Buffer(10X)”, 2020.05,
https://media.cellsignal.com/pdf/9806.pdf
ThermoFisher SCIENTIFIC, “Trypan Blue Exclusion”, 2020.05,
https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/references/gibco-cell-culture-basics/cell-culture-protocols/trypan-blue-exclusion.html
Cell test manual 1, 실험 강의 교안
