소개글
"생화학실험 레포트 단백질 정성분석"에 대한 내용입니다.
목차
1. 단백질 정량 분석
1.1. 정량 분석과 정성 분석의 개념
1.2. 단백질 정량 분석법
1.2.1. UV method
1.2.2. Lowry method
1.2.3. BCA method
1.2.4. Bradford method
1.3. 단백질 정량 분석법의 장단점 비교
1.4. UV/Vis spectrophotometer
1.5. BSA(Bovine Serum Albumin)
2. 실험 재료 및 방법
2.1. 실험 기기
2.2. 실험 시약
2.2.1. Lowry Reagent 제조
2.2.2. Folin & Ciocalteu's Phenol 시약 제조
2.2.3. Protein standard(BSA) 제조
2.3. 실험 절차
2.3.1. BSA 표준 곡선 작성
2.3.2. 미지의 단백질 농도 측정
3. 참고 문헌
본문내용
1. 단백질 정량 분석
1.1. 정량 분석과 정성 분석의 개념
정량 분석은 물질을 구성하는 양적 관계를 명확하게 하는 분석법으로, 물질의 구성성분을 알아내는 정성분석과는 구분된다. 정량분석은 물리화학적인 기계·기구를 사용해서 수행하는 기기분석과 화학반응을 이용해서 성분의 양을 결정하는 화학분석으로 나뉜다. 기기분석은 조작이 간단하고 정밀도가 높아 폴라로그래피, 광흡수분석법, 질량분석법 등의 방법이 사용된다. 화학분석은 중량분석과 용량분석이 있고, 비색분석, 비탁분석 및 전기분해분석 등의 방법이 있다.
반면 정성분석은 물질을 구성하고 있는 화학종, 예를 들면 원소나 이온 등이 가지고 있는 특유한 반응 및 물리적 성질을 이용해서 검출 및 확인하는 분석법이다. 건식분석법과 습식분석법으로 크게 나뉘며, 불꽃반응, 구슬반응, 크로마토그래피 등의 방법이 사용된다.
따라서 정량분석은 물질을 구성하는 성분의 양적 관계를 밝히는 것을 목적으로 하고, 정성분석은 물질을 구성하고 있는 성분이 무엇인지를 밝히는 것을 목적으로 한다고 볼 수 있다.
1.2. 단백질 정량 분석법
1.2.1. UV method
UV method"는 단백질 내의 방향족 아미노산인 페닐알라닌, 티로신, 트립토판이 각각 275nm와 280nm에서 흡광하는 성질을 이용한 것이다. 대부분의 단백질에 있어 이 아미노산들의 양은 거의 일정하기 때문에 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도와 비례하게 된다.
UV method의 장점은 측정이 간단하고 시간이 적게 든다는 것이다. 또한 측정 후에도 단백질이 변성되지 않아 재사용이 가능하다는 장점이 있다. 하지만 단점으로는 단백질 내의 아미노산 조성에 따라 결과 값이 달라질 수 있으며, pH, 염, 핵산 등에 영향을 받기 쉽다는 것이다. 일반적으로 단백질 농도가 50μg~1mg 범위일 때 효과적으로 사용할 수 있다.
따라서 UV method는 단백질 정량 분석에 널리 사용되지만, 단백질 종류에 따라 다른 결과를 보일 수 있고 다른 물질에 의해 영향을 받을 수 있다는 단점이 있다. 따라서 단백질 정량 시 UV법 외에 다른 방법들과 병행하여 보완적으로 사용하는 것이 중요하다.
1.2.2. Lowry method
Lowry method는 단백질 사슬의 아미노산에서 구리이온(Cu2+)의 아마이드 결합으로 환원(Cu+)되는 정도를 측정하는 방법으로, 생화학 분야의 조직 분석에 널리 사용되는 단백질 정량 분석법이다.
이 방법은 두 단계의 반응으로 이루어지는데, 먼저 알칼리 용액에서 구리이온이 단백질 펩타이드 결합 사이에 복합체를 형성하여 Cu2+를 Cu+로 환원시킨다. 그 다음 단계에서는 환원된 Cu+가 Folin-Ciocalteu 시약과 반응하면서 청색으로 발색되는데, 이때의 발색 정도가 단백질의 양에 비례한다.
Lowry method의 장점은 반응의 색이 강하게 나타나 감도가 높아 5 μg/mL의 낮은 농도까지 측정할 수 있다는 것이다. 하지만 단백질의 종류에 따라 결과값의 편차가 있고, 준비 과정과 시약 준비가 복잡하여 시간이 많이 걸린다는 단점이 있다. 또한 시료 내 방해물질이 존재하면 단백질 정량에 사용할 수 없다는 제한점이 있다.
종합적으로 Lowry method는 생화학 분야의 조직 분석에 널리 사용되는 방법으로, 반응의 민감도가 높고 저농도의 단백질도 측정할 수 있는 장점이 있지만 단백질 종류에 따른 편차와 복잡한 시약 준비 과정 등의 단점이 있다고 할 수 있다.
1.2.3. BCA method
BCA method는 단백질과 구리 이온(Cu2+)의 반응을 이용한 단백질 정량 분석법이다. Lowry method와 매우 유사하지만, 약간의 차이점이 있다.
BCA method에서는 단백질과 구리 이온(Cu2+)이 반응하여 Cu+ 이온이 생성되고, ...
참고 자료
단백질 정량 http://blog.naver.com/nango0o/140072058692
화공기초이론및실험2”,실험노트, 5~6p
“화공기초이론및실험2”, 실험4조, 세미나ppt, 6slide
마스터톤의일반화학
http://terms.naver.com/list.nhn?cid=42419&categoryId=42419
http://blog.naver.com/aesca/10170841485
http://www.doopedia.co.kr/doopedia/master/master.do?_method=view&MAS_IDX=101013000858451
전현숙, 2004, “단백질 정량을 위한 형광 염료의 합성과 특성에 대한 연구”, 5-15p
2018 2학기 화공 기초 이론 및 실험2 실험 노트
조영호, 1992, “BCA 정색반응을 이용한 새로운 세포독성 분석법 개발과 항암제 탐색을 위한 그 이용, 8p
https://blog.naver.com/withcoffee67/70157518737
https://blog.naver.com/alth0808/20110298805
MSDS
김해신, 2014, “생화학실험서”, 월드사이언스, 215-216p
