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1. 임상미생물학 실습
1.1. 실험 1: 6.5% NaCl BHI와 BEAA(bile esculin azide agar)를 이용한 Enterococcus faecalis와 Streptococcus viridans의 구분
5% NaCl BHI와 BEAA(bile esculin azide agar)를 이용한 Enterococcus faecalis와 Streptococcus viridans의 구분
6.5% NaCl BHI는 Enterococcus 감별에 사용되는 시험이다. Streptococcus는 이 배지에서 자라지 못하기 때문에 Enterococcus와 구분할 수 있다. 이 시험은 액체배지법과 평판법이 있는데, 평판법으로는 집락이 생기면 양성으로 판단하고 액체배지법은 대조 균주에 비해 혼탁하게 변하면 양성으로 판단한다. 이 실험에서는 BHI에 식염을 6% 첨가하여 최종 농도가 6.5%가 되게 한 것을 사용한다. Enterococcus faecalis는 6.5% 식염에 내성이 있어 뿌옇게 배지에 혼탁해지는 양성 반응을 보인다. 반면 Streptococcus viridans는 6.5% 식염에 내성이 없어 자라지 못해 배지가 투명한 음성 반응을 보인다.
BEAA(bile esculin azide agar)는 장알균의 선택배지이다. 이 배지에는 담즙(bile)과 esculin이 포함되어 있어 담즙에서 증식하고 esculin을 분해할 수 있는 장알균만 자랄 수 있다. Enterococcus faecalis는 담즙에서 증식할 수 있고 esculin을 가수분해하여 배지에 흑색 또는 암갈색을 띠는 양성 반응을 나타낸다. 반면 Streptococcus viridans는 담즙과 esculin을 분해하지 못해 색 변화가 없는 음성 반응을 보인다.
이와 같이 6.5% NaCl BHI와 BEAA 실험을 통해 Enterococcus faecalis와 Streptococcus viridans를 구분할 수 있다. Enterococcus faecalis는 6.5% NaCl BHI에서 양성 반응, BEAA에서 양성 반응을 보이는 반면, Streptococcus viridans는 6.5% NaCl BHI에서 음성 반응, BEAA에서 음성 반응을 나타낸다. 이러한 차이를 이용하면 두 균종을 효과적으로 구분할 수 있다.
1.2. 실험 2: Catalase test와 Hemolysis pattern을 통한 Streptococcus와 Staphylococcus의 구분
실험의 목적은 catalase test를 통해 Streptococcus와 Staphylococcus를 구별하고, Hemolysis pattern을 확인하여 genus Streptococcus를 동정하는 것이다.
실험에 사용된 균주로는 Staphylococcus aureus, Streptococcus viridans, Streptococcus pyogenes, Group L Streptococcus, Streptococcus mutans 등이 있다. Staphylococcus aureus는 catalase 양성이며 베타 용혈성을 나타내고, Streptococcus pyogenes는 catalase 음성이며 베타 용혈성을 나타낸다.
catalase test는 Family Streptococcaceae와 Micrococcaceae를 구별하는데 사용되는데, 3% 과산화수소를 사용하여 기포 발생 여부로 판단한다. Staphylococcus aureus와 같은 catalase 양성 균주에서는 기포가 발생하지만, Streptococcus pyogenes와 같은 catalase 음성 균주에서는 기포가 발생하지 않는다.
Hemolysis pattern 실험은 genus Streptococcus를 동정하기 위해 수행한다. 혈액한천배지에서 α, β, γ 용혈 양상을 관찰할 수 있다. Streptococcus viridans는 알파 용혈성을, Streptococcus pyogenes와 Group L Streptococcus는 베타 용혈성을, Streptococcus mutans는 감마 용혈성을 보인다.
실험 결과, Staphylococcus aureus는 catalase 양성이며 베타 용혈성을 나타냈고, Streptococcus pyogenes는 catalase 음성이며 베타 용혈성을 보였다. 또한 Group L Streptococcus도 베타 용혈성을 나타냈으나 Streptococcus pyogenes에 비해 집락 크기가 작았다. Streptococcus viridans는 알파 용혈성을, Streptococcus mutans는 감마 용혈성을 각각 보였다.
이를 통해 catalase test와 Hemolysis pattern 관찰을 통해 Streptococcus와 Staphylococcus를 구분할 수 있으며, 추가적으로 Streptococcus 균종을 동정할 수 있다. 이러한 미생물 동정 실험은 임상검체에서 분리된 균주를 신속하게 감별하여 적절한 치료를 선택하는데 도움을 준다.
2. 실험 1: 6.5% NaCl BHI와 BEAA(bile esculin azide agar)를 이용한 Enterococcus faecalis와 Streptococcus viridans의 구분
이 실험의 목적은 6.5% NaCl BHI와 BEAA 배지를 이용하여 Enterococcus fae...