소개글
"브래드포드법에 의한 단백질 정량법"에 대한 내용입니다.
목차
1. 서론
2. 단백질 정량법의 이해
2.1. 뷰렛 반응법
2.2. 폴린-로리법
2.3. 바이시네코닌산 방법
2.4. 브래드포드 어세이법
3. 브래드포드 법에 의한 단백질 정량
3.1. 브래드포드 법의 원리
3.2. 장단점
4. 실험 재료 및 방법
4.1. 샘플 시료 준비
4.2. 브래드포드 반응 실험
4.3. 흡광도 측정 및 분석
5. 실험 결과 및 고찰
5.1. 표준 적정 곡선 작성
5.2. 미지 시료의 단백질 농도 확인
5.3. 실험 오차 원인 및 개선방안
6. 결론
7. 참고 문헌
본문내용
1. 서론
단백질은 생명체를 구성하는 중요한 생체 분자이다. 단백질 정량은 단백질의 양을 측정하는 것으로, 생명과학 연구에서 매우 중요한 과정이다. 다양한 단백질 정량법이 존재하며, 그중 브래드포드 어세이법은 빠르고 민감한 방법이다. 브래드포드 법은 단백질이 산성 조건에서 코오마시 블루 G-250 염료와 결합하여 흡수 파장이 변화하는 원리를 이용한다. 단백질 농도에 비례하여 색깔이 진해지므로, 흡광도 측정을 통해 단백질 농도를 정량할 수 있다. 이 방법은 다른 정량법에 비해 간단하고 신속하며, 측정 시간도 짧아 널리 활용되고 있다. 또한 다른 물질들의 방해가 적어 높은 정확도를 보인다. 단, 계면활성제나 지질에 의한 간섭이 있을 수 있으며, 반응물의 불안정성이 단점으로 지적된다. 하지만 이러한 단점들을 보완한다면 브래드포드 법은 단백질 정량에 매우 유용한 도구가 될 수 있다.
2. 단백질 정량법의 이해
2.1. 뷰렛 반응법
뷰렛 반응법은 단백질의 검출에 사용되는 방법이다. 뷰렛 시약에는 2가의 구리이온(Cu2+)이 포함되어 있어 푸른색을 띠고 있다. 시약과 단백질이 만나면 보라색으로 색이 변하는 성질을 이용하여 단백질의 검출에 사용한다. 단백질 내에 두 개 이상의 펩티드 결합이 있는 뷰렛 구조가 구리 이온과 반응하여 보라색의 착화합물을 형성하기 때문이다. 따라서 모든 단백질은 기본적으로 무수히 많은 펩티드 결합으로 이루어져 있어 뷰렛 반응으로 검출할 수 있으며, 단 몇 개의 펩티드 결합을 가지고 있는 펩티드도 검출할 수 있다. 5%의 수산화나트륨 용액과 1%의 황산구리 수용액을 섞어 만든 뷰렛 용액(푸른색)을 이용하여 단백질을 검출하는 반응이 이루어진다. 뷰렛 용액과 단백질이 만나면 단백질의 펩티드 사슬이 구리와 나트륨과 결합하여 펩티드-구리 복합체를 생성하면서 색이 보라색으로 변하게 된다. []
2.2. 폴린-로리법
폴린-로리법은 단백질의 정량 방법 중 하나이다. 이는 단백질이 알칼리성 용액에서 폴린-시오칼토 시약과 반응하여 청남색을 발생시키는 것을 이용한 것이다. 단백질을 함유한 시료에 황산구리, 시트르산나트륨을 함유하는 알칼리성 용액과 폴린-시오칼토 시약을 첨가하여 750nm에서 비색정량한다. 이는 펩타이드 결합 및 트립토판 잔기, 타이로신 잔기에 의한 페놀 시약의 환원 반응에 의한 것으로, 뷰렛 반응에 비해 감도가 높아 10μg의 단백질을 정량할 수 있다. 또한 혼합된 물질의 영향을 적게 받는다.
2.3. 바이시네코닌산 방법
바이시네코닌산(bicinchoninic acid, BCA) 방법은 단백질 정량법의 하나이다. 이 방법은 단백질이 알칼리 조건에서 구리2가 이온을 구리1가 이온으로 환원시키는 성질을 이용한 것이다. 구리1가 이온과 초록색의 BCA 시약이 반응하여 보라색을 형성하는데, 이 반응의 정도가 단백질의 농도에 비례한다.
따라서 595 nm 파장에서 흡광도를 측정하면 단백질의 양을 확인할 수 있다. 이 방법은 로위 방법보다 감도가 좋고 한 단계의 혼합과정만으로 간단히 수행할 수 있다는 장점이 있다. 또한 다른 완충용액이나 염, 요소 등의 영향을 덜 받는다. 그러나 발색 정도가 시간에 따라 일정하지 않고 환원당 등의 물질이 있는 경우 영향을 받을 수 있다는 단점이 있다. 전반적으로 방법이 간단하고 넓은 범위의 온도에서 단백...
참고 자료
http://study.zum.com/book/12117
K-MOOC, “단백질의 정량”,
http://www.kmooc.kr/courses/course-v1:KangwonK+KangwonK001+2020_1_1/courseware/788caf58bbc449379caf81b97600249a/00c859a7ce014b5ba11d918c353136ca/1, (2021년 4월 1일 목요일)
이철호. (1999). Correlations between spectrophotometry and Bradford' dye - binding assay for protein quantitation. 산업기술연구소 논문집, 6(0), 169-175
위키백과, “브래드퍼드 단백질 정량법”,
https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%B8%8C%EB%9E%98%EB%93%9C%ED%8D%BC%EB%93%9C_%EB%8B%A8%EB%B0%B1%EC%A7%88_%EC%A0%95%EB%9F%89%EB%B2%95, (2021년 4월 1일 목요일)
위키백과, “Bicinchoninic acid assay”,
https://en.wikipedia.org/wiki/Bicinchoninic_acid_assay, (2021년 4월 1일 목요일)
