소개글
"브래드포드법"에 대한 내용입니다.
목차
1. 단백질 정량 실험
1.1. Bradford 단백질 정량법
1.1.1. Bradford Assay의 원리
1.1.2. 표준 곡선 작성
1.1.3. 시료의 단백질 농도 측정
1.2. Biuret 단백질 정량법
1.2.1. Biuret 반응의 원리
1.2.2. 표준 곡선 작성
1.2.3. 시료의 단백질 농도 측정
1.3. 두 방법의 비교 및 고찰
2. 참고 문헌
본문내용
1. 단백질 정량 실험
1.1. Bradford 단백질 정량법
1.1.1. Bradford Assay의 원리
Bradford Assay의 원리는 산성용액에서 Coomassie Brilliant Blue 염료(470nm)가 단백질의 특정 아미노산과 결합하여 단백질 복합체를 형성하면 빛의 파장이 변화하여 595nm에서 파란색으로 변하는 것을 이용한 것이다.
이때 분광광도계(UV-Visible spectrophotometer)를 이용하여 흡광도 변화를 측정함으로써 단백질을 정량할 수 있다. 이 방법은 매우 빠르고 비용이 낮은 장점이 있으나, 의미 있는 농도 범위가 좁고 다른 화학 물질-단백질/염료 간 상호작용이 분석을 방해할 수 있다는 단점이 있다.
1.1.2. 표준 곡선 작성
단백질 표준곡선을 작성하기 위해서는 먼저 농도가 잘 알려진 기준 단백질이 필요하다. 보통 BSA(bovine serum albumin)을 많이 사용하는데, 여러 농도의 BSA 용액을 만들어 흡광도를 측정하여 표준곡선을 작성한다.
이때 y축은 흡광도, x축은 단백질 농도가 되도록 그래프를 그린다. 이렇게 작성된 표준곡선 내에 측정하고자 하는 시료의 흡광도 값이 위치해야 시료의 단백질 농도를 정확히 알 수 있다. 또한 이 표준곡선의 결정계수(R^2)가 1에 가까울수록 신뢰도가 높다고 볼 수 있다.
표준곡선을 통해 미지 시료의 단백질 농도를 알아내는 과정은 다음과 같다. 먼저 시료의 흡광도를 측정한 뒤, 표준곡선 상에 그 값을 대입하여 x 값(단백질 농도)을 구한다. 이때 시료를 희석했다면 희석배수를 고려하여 최종 시료의 단백질 농도를 계산해야 한다.
이처럼 표준곡선 작성은 Bradford 단백질 정량법에서 매우 중요한 과정이다. 정확한 표준곡선을 확보해야 미지 시료의 단백질 함량을 신뢰성 있게 측정할 수 있기 때문이다.
1.1.3. 시료의 단백질 농도 측정
시료의 단백질 농도 측정은 표준 단백질을 이용하여 작성한 표준곡선을...
참고 자료
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Ninfa, Alexander J (2010) Fundemental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology, wiley pp. 117-118
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Bradford, M.(1976), A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye-binding, Anal. Biochem. 72, 248-254
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