실험4. 단백질 정제 ( protein purification)

소개글

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목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Methods
Ⅳ. Discussion
Ⅴ. Reference

본문내용

Abstract
단백질 분리정제는 단백질의 생화학적 분석 외에 많은 실험적 응용에 필수적인 과정이다. 본 실험에서는 단백질의 분리정제 기술 Ni-NTA를 이용하는 실험을 진행하였으며 이 기술의 원리를 이해하고 이를 익히는 것을 목적으로 한다. 본 실험에서는 3가지의 cell인 E. coli (BL21 DE3), E. coli (BL21 DE3) containing pET11a-ADH, E. coli (BL21 DE3)-DcHsp70 containing pET11a-ADH를 준비하였고 total protein을 추출하였다. 추출한 protein에서 ADH를 분리 정제하기 위해서 Ni-NTA를 이용하였다. 후에 단백질의 정제 여부를 확인하기 위해서 SDS-PAGE를 실시하였다. 실험적으로 pET-11a에 ADH단백질이 발현되는 부분앞에 Histidine tag가 삽입되어 있는데, 이 융합단백질에 Ni-NTA를 반응시키면 결합하게 되는데 이 결합된 Ni-NTA와 융합단백질만 칼럼을 이용해 통과시키면 Ni-NTA와 융합단백질만 남게 된다. Wash buffer를 통해 불순물을 제거하고, Imidazol이 포함된 elution buffer을 통해 Ni-NTA를 다시 융합단백질로부터 분리시킨다. 이는 니켈과 친호성이 높은 Imidazol로 인해 분리되는 것이다. 실험 결과 DcHsp70이 삽입된 BL21이 제일 많은 ADH재조합 단백질이 정제되었다. 이는 DcHsp70가 외부 환경적 스트레스로부터 단백질 발현을 보호하였기 때문에 나타난 결과라고 보았다. 또한 본 실험은 DcHsp70의 역할을 다시 알게 된 실험이였다. 이러한 기술을 통해 단백질을 분리정제하는 것은 많은 분야에 응용되고 있으며 그만큼 중요한 기술이다. 이러한 기술 외에 다른 단백질 분리 정제 기술 또한 원리를 이해하고 습득해야 할 것이다.

참고 자료

Wikipidia, affinity chromatography,https://en.wikipedia.org/wiki/Affinity_chromatography