SDS-PAGE를 통한 단백질의 발현 정도를 확인

소개글

SDS-PAGE를 통한 단백질의 발현 정도를 확인한다

목차

실험 일자
실험 주제 :
실험 원리
실험 과정
실험시 주의 사항

본문내용

실험 원리 : SDS-PAGE란 Sodium Dodecyl Sulfate PolyAcrylamide Gel Electrophoresis의 약자로, agarose gel이 detection을 목적으로 한다면 SDS-PAGE는 protein detection이 목적이다. SDS는 detergent로써, 단백질을 둘러싸 단백질 전체의 성질이 negative로 변하게 한다. Sample을 로딩하고 전기를 걸어주면 이온들은 (+)쪽으로 진행하게 되는데, 이 때 이동하는 것이 단백질, Cl이온, Glycine 이온 등이 있다. SDS에 둘러싸인 단백질과 Cl-은 음전하를 띠지만 glycine은 일부만 음전하를 띠게 되어 Stacking gel에서의 이온들의 이동속도는 Cl-, 단백질, Glycine 이온의 순서로 빠르다. 전기장을 걸어 주었을 때 Cl-은 가장 작기 때문에 가장 먼저 이동하고 Glycine은 늦게 이동하게 된다. 이렇게 이온들간의 이동의 차이가 생기면 그 사이에는 국부적으로 High Voltage gradient가 만들어지게 되며 결국 그 안의 단백질의 움직임은 매우 빠르게 움직이게 된다. 이렇게 단백질의 이동속도가 두 이온 사이에서 빨라진다는 것은 단백질의 크기차이로 인한 이동속도의 차이를 거의 없게 만드는 의미가 있다. 이렇게 되면 separate gel에 들어가기 전에 단백질들이 같은 출발선상에 위치하게 되어 separate gel에서 분자량에 따른 이동속도의 차이를 더 잘 확인할 수 있게 된다. Separate gel은 stacking gel과는 달리 pH가 8.8이기 때문에 glycine이 완전이 이온화되어 이동속도가 Cl->glycine>단백질의 순서로 바뀌게 된다. 따라서 Cl-와 glycine 사이에 형성되었던 high voltage gradient가 거의 사라지게 되고 단백질의 이동은 자신의 분자량에 영향을 받게 된다.

참고 자료

없음