생명과학/생명공학/생명시스템 관련 유전공학 각종실무 Cell lysis, SDS-PAGE 레포트 (vector 맵사용)레포트입니다.

소개글

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목차

1. Introduction
2. Material
3. Method
4. Result
5. Discussion

본문내용

Introduction
-Cell lysis, SDS-PAGE-
Cell lysis는 목적 단백질을 포함하고 있는 cell의 세포벽과 핵막을 깨뜨리고 목적 단백질을 얻기 위하여 진행하는 실험 과정으로써 다양한 Lysis solution을 사용하여 사용 목적에 맞는 solution을 사용하여 단백질을 얻어 내야 한다.
SDS-PAGE는 단백질이나 핵산의 구조를 꺠뜨려 선형을 만든 뒤 Acrylamide gel을 이용하여 전기영동하는 것을 말한다. 전기영동은 질량뿐 아니라 분자의 구조에 따라서도 밴드의 위치가 달라지므로 단백질을 모두 선형으로 만들어 본래의 구조에 관계없이 순수하게 질량에 의해서만 나열되게 하는 목적으로 하는 단백질 분리 방법이다. 하지만 단백질이 선형이 되어 몬래의 기능이 상실되므로 원하는 단백질만을 염색하여 나타나게 할 수는 없다. 만약 특수염색으로 원하는 단백질만을 염색하고 확인하려 할 때는 SDS를 제외한 PAGE만을 하여 단백질의 본래의 형태를 유지시켜야 한다.

<중 략>

Discussion

이번 실험은 cell lysis를 통한 단백질 추출과 SDS-PAGE를 이용한 단백질 분석을 진행하였다. 사전실험으로 해놓은 ITPG induction을 통한 단백질 발현을 하였다. 우리가 원하는 정도를 발현하도록 하기 위한 과정을 induction이라고 하는데 ITPG가 그 역할을 해준다. 원래 Vector에는 Lac operon이 중요한 역할을 하는데 보통 발현벡터에는 T7 promoter 다음에 Lac operon이 위치하고 있는데 이부분을 Lac repressor가 결합하고 있어서 평상시에는 T7 RNA Polymerase의 작용을 막고 있다. 이러한 operater 자리에 결합하고 있는 Lac repressor는 alloctose와 같은 inducer와 결합하면서 떨어지게 되고 이로써 전사가 시작되는 원리이다.

참고 자료

없음