colony에서 추출한 DNA의 electrophoresis

소개글

colony에서 추출한 DNA의 electrophoresis에 대한 실험보고서 입니다.
보충자료로 Agarose gel 만들기에 대한 자세한 내용도 들어있습니다.

목차

1. title:
2.materials:
3.purpose:
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. 보충 자료
8. Reference

본문내용

6. Discussion
이번에도 처음에 했던 실험의 전기영동과 같은 실험이었다. 결과도 전원 모두 나와서 기분이 좋았다. 또한 2학년 2학기의 세포학실험의 마지막 실험이었기 때문에 더 좋았는지도 모르겠다. 이번 실험을 통해서 저번에 확실히 잘 몰랐던 전기영동 과정을 확실히 알 수 있었다. 보충자료는 agarose gel 만드는 방법에 대해서 조사해 보았다.

7. 보충 자료
◈ Agarose gel 만들기
1. x TAE용액으로 희석하여 99mL에 agarose 1g(1.0%)을 섞어서 1%로 만든다. 열을 가하여 완전 용해시키고, EtBr을 넣고 잘 섞은 후 뜨거운 용액을 식힌 후 젤을 굳히는 판에 붓고 comb을 꽂고 식을 때 까지 기다린다.
2. 잘 섞은 뒤 주형에 넣고 굳혀서 agarose gel을 만든다.(굳힐 때는 comb를 끼워서 well을 만든다.)
3. 전기 영동 장치에 1 x TAE를 넣은 후 gel을 넣는다.
4. well의 가장 왼편에 size maker를 넣고 차례로 loading dye와 DNA를 섞은(1:5정도) solution을 주입한다.
5. 전기를 걸어준 뒤 20~30분 기다린다
6. DNA가 내려오면 자외선 하에서 확인한다.
* 낮은 전압에서 선형으로 된 DNA 조각의 이동속도는 부하되는 전압에 비례한다. 그러나, 전기장에서 전류의 흐름이 커짐에 따라 높은 분자량을 가진 DNA 조각의 이동속도는 빨라지게 되므로 전압이 올라감에 따라 agarose gel에서 DNA 분리 효과가 감소된다. 2 kb보다 큰 DNA 조각들의 분리를 최대로 하기 위해서는 agarose gel에 5 V/cm 이상의 전압을 부하시켜서는 안 된다.
* 전기영동 tank와 gel은 동일한 전기영동 완충액을 사용해야 한다. 이온강도 또는 pH에 약간의 차이만 있어도 DNA 조각의 이동속도에 크게 영향을 주기 때문이다.

참고 자료

http://www.cheric.org/ippage/e/ipdata/2001/12/file/e200112-10.hwp
http://home.knue.ac.kr/%7Ebiomodule/module/module07_t.hwp