[A0] 서강대 현대생물학실험2 3차 풀레포트 - DNA subcloning - Cloning(Ligation, Transformation)과 Insert 확인(Mini-prep, Double cut & gel electrophoresis)

소개글

"[A0] 서강대 현대생물학실험2 3차 풀레포트 - DNA subcloning - Cloning(Ligation, Transformation)과 Insert 확인(Mini-prep, Double cut & gel electrophoresis)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

본 실험 과정 중 크게 두가지 부분에서 예상과 다른 결과가 얻어졌다. 하나는 DNA ligation 실험의 negative control이며, 다른 하나는 제한효소를 처리하여 insert와 vector를 분리한 후 gel electrophoresis한 결과이다.
먼저, Negative control로 설정한 vector only 배지에서 예상보다 많은 colony가 나타났다(Figure 1-A). Vector로 사용한 pET-21α(+)는 HindⅢ와 NdeⅠ으로 double cut되어 있으므로 self-ligation이 이론적으로 잘 되지 않아야 한다. 따라서, ampicillin-LB agar plate에서 colony가 많이 관찰되지 않을 것으로 예상하였다. 그러나 insert와 vector를 ligation 시켰을 때와 colony 수에서 크게 차이나지 않았다. 이러한 결과를 이끌어낼 수 있는 원인으로, 다섯 가지를 고려해볼 수 있다. 1) Vector가 제대로 double cut 되지 않았을 가능성이 있다. 하나의 restriction enzyme으로만 digestion된 경우나 아예 cut되지 않은 경우가 많다면, vector가 transformation되어 amp-LB agar plate에서 colony를 형성할 수 있다. 그러나 이전 실험에서 두 restriction enzyme의 활성이 잘 나타남을 gel electrophoresis을 통해 확인하였으므로 이것이 이번 실험과 같이 많은 colony가 형성된 원인은 아닐 것이다. 2) ligase가 상보적이지 않은 양 말단을 ligation시켜 self-ligation이 일어났을 가능성이 있다. 우선 Ligase의 활성은 ligase 종류에 따라 다르다.

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