생화학및분자생물학실험 Plasmid miniprep / DNA electrophoresis / Transformation 예비보고서

소개글

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목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험방법
4. 출처

본문내용

1. 실험 목적
- Plasmid mini prep kit를 이용해서 E.coli로부터 DNA를 분리하여 정량 해보고 Agarose gel electrophoresis를 통해 확인한다.
- 얻어진 DNA와 Protein Expression용 Competent cell을 이용하여 Transformation한다.

2. 이론
1) Electrophoresis
: 콜로이드 용액 속에 전극을 넣고 직류 전압을 가했을 때 콜로이드 입자가 어느 한쪽의 전극을 향해서 이동하는 현상.
√ Agarose gel electrophoresis
: gel electrophoresis의 하나로서 정제된 한천 겔(gel)을 지지체로 사용하여 직류 정전압의 전류를 통함으로써 하전된 목적물질을 분리한다. 핵산 특히 DNA 분자나 그의 단편(제한효소처리로 생성된 단편)의 분리에 사용되고 있다. 보통 0.5~2.0% 농도의 agarose를 사용한다. 이 겔(gel)을 유리관 중에 만든 디스크(disc)식과 수직 혹은 수평의 겔 판(gel plate) 중을 전기 이동시키는 평판식이 있다. DNA는 -(음)로 하전하므로 ＋(양)전극으로 영동 하며 분자의 크기에 따라 작을수록 빨리 영동 한다. 또 영동속도는 DNA 분자의 형상에 따라서도 다르며 같은 분자량이라도 폐환상, 직쇄상, 개환상의 순으로 이동한다. DNA의 위치는 에티듐브로미드 용액으로 염색시켜 자외선으로 조사하면 붉은 색 또는 오렌지색의 밴드로 검출된다. DNA의 제한효소처리와 조합시켜 DNA 단편의 분자량결정, plasmid의 검출, 특정 DNA 단편의 분리 등 핵산 연구법 중에서도 장치의 간편화 등으로 일상적인 방법으로 이용되고 있다

2) Plasmid mini prep
- Mini prep: DNA를 소량 추출한다는 의미이며 Plasmid DNA를 추출하는 것이 목적이다.

참고 자료

www.ibric.org >my board> view: plasmid DNA의 분리 및 정제방법
[네이버 지식백과] 플라스미드 [plasmid] (미생물학백과) https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5145033&cid=61232&categoryId=61232
[네이버 지식백과] 전기이동 [electrophoresis, 電氣移動] (두산백과)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1139390&cid=40942&categoryId=32252
[네이버 지식백과] 아가로오스 젤 전기영동(아가로오스 겔 전기영동) [agarose gel electrophoresis] (식품과학기술대사전, 2008. 4. 10., 한국식품과학회)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=295003&cid=60262&categoryId=60262
[네이버 지식백과] 형질전환 [Transformation] (분자·세포생물학백과)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5569117&cid=61233&categoryId=61233