미생물 면역학 실험보고서

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목차

1. Preparation of media (LA/LB & TGY broth-agar)
2. Bacteria cell culture
3. Genome prep (Genomic DNA extraction)
4. PCR for 16S rRNA sequencing
5. Agarose gel Electrophoresis
6. DNA sequencing analysis
7. Measurement of CFU
8. Isolation of non-pigment colonies
9. PCR for carotenoid genes
10. Plasmid mini prep
11. Transformation
12. Data analysis

본문내용

-실험과정
-Cell harvesting for Gram-Positive bacteria
1. 70°C incubator를 미리 켜서 온도를 올려 놓는다.
2. Lysozyme buffer (sample 당 0.004g lysozyme + 200μl (마이크로리터; λ = 람다) GPT buffer) 를 준비한다.
3. 유전체를 뽑고자 하는 균을 overnight-culture(12~16h)시킨 후, EP-tube에 1.5ml씩 담고 2분간 centrifuge 시킨다. 그 후, 상층액을 모두 버린다.
4. Lysozyme buffer 200μl를 넣고, pipetting으로 잘 섞어준다.
5. 10분간 실내온도로 incubation시킨다. (2~3분마다 가볍게 흔들어줄 것)
-Cell lysis : Lysis buffer는 세포막을 깨는 용도
6. GB buffer 200μl를 넣고, 5초간 pipetting 해준다.
7. 70°C incubator에 준비한 sample을 넣고 10분간 incubation시킨다. (3분마다 가볍게 흔들어줄 것) 이때, D.W를 70°C incubator에 넣어둔다.(elution) 그리고 Collection tube에 GB Column을 미리 끼워 넣고, labeling한다.
-DNA Binding
8. 에탄올 (96~100%) 200μl를 넣고, 즉시 vortexing으로 10초간 섞어준다.
9. EP-tube에 담긴 sample을 준비한 GB Column에 넣는다.
10. cap을 닫고 2분 30초간 centrifuge (14,000-16,000 x g) 시킨다. 그 후, 걸러진 액체를 버린다.
-Wash : Column과 Bead에 부착된 DNA 떨어뜨리기
11. W1 Buffer 400μl를 GB Column에 넣은 후, 2분간 centrifuge (14,000-16,000 x g) 시키고 걸러 진 액체를 버린다.
12. (에탄올이 첨가된) Wash Buffer 600μl를 GB Column에 넣는다. 2분간 centrifuge (14,000- 16,000 x g) 시키고 걸러진 액체를 버린다.

참고 자료

없음