단백질 전기영동 및 membrane transfer

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단백질의 분리 및 정제과정은 보통 여러 단계에 걸쳐 진행된다. 이때 ‘겔 전기 영동(Gel electrophoresis)’의 경우 이름에서 알 수 있듯이 전기를 이용한 분석 방법인데, 틀에 의해 제작된 폴리아크릴아마이드 젤을 이용한다. 폴리아크릴아마이드는 분자형태가 거름망같이 얽혀 있는 형태이며, 관찰하고자 하는 분자들을 거르는 과정을 통해 분리할 수 있다. 이때 폴리아크릴아마이드 젤을 제작할 때, 그 농도를 조절할 수 있는데, 이 농도가 높을수록 그 망의 촘촘한 정도가 높아진다.
이때, Gel electrophoresis의 경우 전기를 이용하는 만큼 해당 단백질의 전하 값 즉, pI값이 중요하다. pI값이란 분자가 전하를 갖는 상황에서, 해당 용매의 pH값을 변화시킬 때 알짜 전하의 값이 0이 되는 용매의 pH값을 말한다. 이것을 이용하면 해당 단백질의 특정한 환경에서의 pI값을 이용하여 마치 자석과 같은 원리로 단백질 표본을 겔 끝으로 밀어내고 잡아당길 수 있게 되며, 이 실험을 시행할 때, 해당 단백질의 전하, 크기, 모양 등이 영향을 줄 수 있기 때문에 해당 단백질의 정보를 알기 위한 ‘전처리’가 중요시되는 실험 중 하나이다.
pI값을 예측하는 실험에는 ‘등전집중법’ 즉, Isoelectric focusing이 있다.
이는 단백질이 특정 pH값의 용액에서 각자의 pI값에 따라 알짜 전하 값이 0의 전하 값을 갖는다는 특성을 이용한 실험으로, 양끝에 각각 +/-극을 조성

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