[화학생물학실험 예비레포트 및 결과레포트] SDS-PAGE & Western Blot

목차

1. 실험제목
2. 실험 목적
3. 실험 목적
4. 실험 이론
5. 주의사항
6. 실험방법
7. 실험결과
8. 고찰

본문내용

Western Blot은 특정 단백질을 확인하기 위해 사용하는 분자생물학 기술로, SDS-PAGE를 통한 젤 전기영동 후 transfer, blocking, incubation 등의 과정을 거쳐 검출이 가능하다.

복잡한 구조를 가진 단백질은 SDS-PAGE로 분리가 가능한데, 이때 양친매성 분자인SDS는 단백질의 작용기에 붙어 음전하를 갖게하고 2-mercaptoethanol는 이황화 결합을 분해하여 3차 구조의 단백질을 1차 구조의 형태로 만들어준다. 사용되는 Gel인 Polyacrylamide는 가지고 있는 그물 구조를 이용해 단백질을 분리한다.

다음으로 transfer에서는 SDS-PAGE를 통해 크기에 따라 분리된 단백질을 항체가 인식하고 결합할 수 있도록 한다. 우선 남아있는 SDS를 제거하기 위해 membrane에 methanol을 가하여 단백질과 더 잘 결합할 수 있는 상태를 만들어준다. 이후 준비된 filter에 buffer를 적시고 전극과 연결하면 음전하의 단백질이 양전하 쪽으로 이동하며 membrane에 부착될 수 있다. 이는 가장 대표적인 electrotransfer 방식이며 wet, semi-dry, dry transfer 등 다양한 방법의 transfer가 존재하기 때문에 목적에 적합하게 선택해야 한다.

Transfer가 끝났으면 incubation 전에 transfer를 통해 얻은 membrane에서 target protein이 부착되지 않은 membrane의 나머지 부분을 차단하는 blocking 과정을 거친다.

참고 자료

없음