생명과학 보고서_SDS-PAGE & Western blot(아주대 전공실험2)

소개글

생명과학 전공실험 만점 받은 보고서입니다

목차

1. 실험 목표
2. 실험 원리
3. 실험 방법 및 재료
4. 실험 결과
5. 고찰
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
본 실험은 SDS-PAGE를 통해 단백질을 분자량에 따라 분리시킨 후, Western blot의 항원-항체 반응을 이용하여 단백질 정량 과정과 sample 단백질에 처리한 MG132의 효과, 즉 proteasome activity를 확인하기 위해 수행되었다.

2. 실험원리
모든 단백질 분리, 정제 기법은 전하, 분자량, 결합 친화도의 차이를 이용한다. 원래 당과 아미노산 같은 분자량이 낮은 물질을 분리하기 위해 고안된 chromatography는 단백질 정제에 필요한 도구이다. 다양한 Chromatography 기법은 크기, 모양, 무게, 특정 결합 친화도을 기반으로 단백질 혼합물을 분리하는 데 이용된다. 용액에 녹은 단백질 혼합물(이동상)이 고체 matrix(정지상)를 통과하면서, 이동상이 정지상과 계속 상호작용 하려하는 것으로 인해 분리가 일어난다. 전기영동(electrophoresis)은 단백질은 전하를 띄기 때문에 electric field에서 이동할 수 있음을 이용한다. 전기영동 과정에서 분자는 net charge의 차이로 인해 분리된다. 예를 들어, positive net charge를 띄는 분자는 음극을 향해 이동하고, 반대로 negative net charge를 띄면 양극을 향한다. Net charge가 없는 분자는 움직이지 않는다. 생화학에서 가장 널리 쓰이는 기법인 전기영동은 polyacrylamide나 agarose같은 gel을 사용하여 수행된다. gel-filtration chromatography에서처럼, gel은 단백질을 분자량과 모양에 따라 분리시킨다. 따라서 gel 전기영동은 복잡한 단백질 복합체를 분리하는데 매우 효과적이다. 전기영동으로 생성된 band는 다양한 방법으로 처리된다. 특정한 bands는 UV light로 시각화된 다음 잘릴 수 있고, 단백질을 갖고 있는 slice는 buffer로 elute되고 향후 분석을 위해 마련된다.

참고 자료

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