효소반응 속도론 결과보고서

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목차

Ⅰ. 실험방법
Ⅱ. 실험 결과
Ⅲ. 토의

본문내용

Ⅰ. 실험방법
1. preparation
- spectrophotometer, Cuvette, Stop watch
- calf intense alkaline phosphatase, p-nitrophenylphosphate(10mM), Unknown inhibitor A
Reaction buffer(100mM Tris-HCl (pH 9.5), 0.2mM ZnCl2, 0.2mM MgCl2), Stop buffer(1M NaOH), D.W

2. Assay
① Spectrophotometer를 켜서 warm-up 시키고, 파장을 410nm로 맞춘다.
② E-tube에 reaction buffer, DW, substrate, (inhibitor)를 넣어 잘 섞어준다. (table 참고)
③ Enzyme을 최종적으로 첨가하면 반응이 시작된다. (섞고 즉시 inverting)
④ 0, 1, 2, 3분간 상온에서 반응 후, 1M NaOH 250를 첨가하여 반응을 중단시킨다. (섞고 즉시 inverting)
⑤ Cuvette에 1mL 반응용액을 넣어 OD410을 측정한다.

A. Determining value of alkaline phosphatase
(1~3번은 0, 1, 2, 3분 반응을 위해 각 4개씩 준비)

참고 자료

없음