단백질 정량법(PCR and eletrophoresis) 결과보고서
- 최초 등록일
- 2021.09.14
- 최종 저작일
- 2020.08
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소개글
"단백질 정량법(PCR and eletrophoresis) 결과보고서"에 대한 내용입니다.
목차
Ⅰ. 실험방법
Ⅱ. 실험결과
Ⅲ. 토의
본문내용
Ⅰ. 실험방법
1. 준비
BSA(2mg/ml), BCA reagent(A, B 시약), Bradford Reagent, microplate
2. 단백질 정량
1) 표준 물질 준비
조별로 BSA stock(2mg/ml) 1ml를 이용하여 표준물질을 준비한다. (range = 20-2000µg/ml)
2) BCA method
① 50:1의 비율로 A와 B 시약을 섞는다. (working reagent. WR)
⇒ 필요한 양을 계산하여 실험 직전에 만든다. (조당 3ml 씩)
② 표준물질 및 미지 단백질 시료를 microplate에 준비한 다음 잘 섞어준다.
<중 략>
Ⅲ. 토의
단백질 정량법에는 UV method, Biuret method, Lowry method, BCA method, Bradford method 등 다양한 방법이 있지만, 이번 실험에서 우리는 BCA method, Bradford method를 사용하여 진행하였다.
BCA method는 가장 많이 사용되고 있는 단백질 정량법 중 하나로써 BCA(Bicinchoninic acid)를 사용한다. 2가의 구리이온(Cu2+)은 단백질의 peptide bond와 접하게 되면 1가의 이온(Cu+)으로 환원되는데 구리이온의 환원은 단백질 농도에 대해 비례하게 되어 이렇게 형성된 구리이온(Cu+)이 BCA와 결합하여 BCA-Cu+ complex를 형성하게 된다. BCA-Cu+ complex는 562nm에서 강한 흡광을 나타내며 시료의 색깔은 보라색을 띠게 된다.
참고 자료
없음