학점4.5/학과수석/실험강좌수석/보고서만점-Enzyme kinetic assay:Horseradish peroxide 예비 및 결과보고서/ 효소반응속도론
- 최초 등록일
- 2020.03.31
- 최종 저작일
- 2019.03
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소개글
작정자는 1년간 학점 4.5(A+), 학과수석, 실험강좌 수석, 보고서 만점을 받았으며
본 보고서는 horseradish peroxide를 활용해 enzyme kinetic assay를 알아보는 실험 보고서입니다.
목차
1. Enzyme kinetic assay: Horseradish Peroxidase 예비 보고서
1) 실험목적
2) 실험이론 및 원리
3) 실험기구 및 시약
4) 실험방법
2. Enzyme kinetic assay: Horseradish Peroxidase
1) 실험결과
2) 고찰
3) 참고문헌
본문내용
Ⅰ. 실험 결과
▶실험 결과 분석 개요
ABTS 농도별로 시간에 따른 흡광도 변화를 그래프로 그린다. 이후 이 그래프를 통해 초기 속도 Vo를 구한다. 이 때 구한 초기 속도Vo와 기질 농도[ABTS]간의 그래프를 그린 후 직선이 되는지 확인한다. 초기 속도는 두 가지 방법으로 구한다. ①시간-흡광도 그래프의 추세선을 미분하여 t=0일 때의 값을 구한다. ② 초기 시간 값 두 개를 직선으로 연결하여 기울기를 구한다.
이 두 가지 방법으로 구한 Vo값을 이용하여 Lineweaver-burk plot을 통해 Vmax와 Km 값을 구한다. Lineweaver-burk plot에서 x절편이 -1/Km이며 y절편은1/Vmax이다. Lineweaver-burk plot을 통해 구한 Vmax와 Km을 이용하여 Kcat값을 구한다.
<중 략>
Horseradish peroxidase (HRP) 10㎍/㎖ 100㎕와 기질인 ABTS 2㎍/㎖ 300㎕를 사용하여 용액을 생성하였다. 전체 총 부피가 1ml로 HRP의 기존 부피의 10배가 되었으므로 농도는 1/10로 감소, 따라서 효소 농도=[HRP]=1㎍/㎖이다. HRP의 분자량은 약 44000g/mole 이므로 μM 농도로 환산하면 0.0227μM 이 된다. 마찬가지로 기질 부피의 10/3배 이므로 ABTS 기질의 농도는 15μM, 30μM, 60μM, 90μM, 120μM이다. (그러나 편의를 위하여 계산을 제외한 그래프에는 희석 전 ABTS 농도로 기입하였다.) 실험 결과를 토대로 lineweaver-burk plot을 그려보면 다음과 같다.
참고 자료
강치욱, “생물학총론” 2019, p58
생명과학대사전, 초판 2008, 개정판 2014, 강영희
