[생화학 실험] 효소정제

소개글

직접 실험을 하여 spectrophotometer 로 측정한 결과 그래프도 있습니다..

목차

1. 염석(Salting out)
1) 실험원리
2) 실험 기구
3) 실험방법

2. 투석(Dialysis)
1) 실험원리
2) 실험 기구
3) 실험방법

3. 이온교환(Ion Exchange)
1) 실험원리
2) 실험 기구
3) 실험방법

본문내용

① 염석시 염첨가량 결정에 따른 예비실험
- 염석 3시간 전에 배양액 10ml을 채취해서 Centrifugation 12000 rpm/10min
- 상징액을 E.P tube에 각각 1ml씩 넣는다.
- 냉장고에서 3시간 방치한다.
- Centrifugation 12000 rpm/10min
- 상징액을 Co-E로 하여 Enzyme activity를 측정한다.
- 활성이 가장 없는 염농도를 선택한다.
(투석시간 절약, 불필요한 단백질의 제거 효과)
② 염첨가량에 대한 예비 실험이 끝나면 배양액을 꺼내서 mass cylider에 정량한 다.
③ 배양액을 E.A를 측정한다.
④ 염을 예상 염첨가량의 5%를 더하여 첨가한다.
⑤ 염을 녹일 때는 냉장고에서 magnetic stir를 이용하여 천천히 녹이도록 한다.
⑥ 냉장고속에 방치 할 때는 이물질이 들어가지 않도록 주의 한다.
⑦ 염석이 끝나면 10,000/3분으로 Centrifugation하며 그 상징액은 mass cylinder에 조심스럽게 부어 정량하고 sup를 따를 때는 ppt가 cell의 상단으로 가도록 해서 정량한다.

2. 실험 기구 및 시약
메스실린더
셀로판튜브

참고 자료

생화학실험서 생물화학연구회 동명사 1985
실험생화학 한국생화학 편찬위원회 탐구당 1994