sds page 외 기타 실험에 관한 생화학 보고서
- 최초 등록일
- 2019.11.30
- 최종 저작일
- 2019.05
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목차
1.실험 목적
2.실험 이론
3.DATA & RESULTS
본문내용
실험 목적
Human DNA인 PTP1B를 삽입한 plasmid를 갖는 E.Coli로 실험을 진행하였다. E.Coli에 plasmid vector가 삽입 되었는지 확인하기 위하여 E.Coli에서 plasmid DNA를 분리, 정제하고 restriction enzyme을 이용하여 plasmid DNA를 잘라 전기영동을 통해 PTP1B를 확인하였다. 그 후, 삽입 된 PTP1B가 E.Coli안에서 발현되는지 알아보기 위해 단백질을 정제하여 SDS-Gel electrophoresis를 진행하였다.
실험 이론
① 목적
주로 단백질 정제에 사용됨. GST antibody로 immunoprecipitation 하기도 한다.
② 원리
affinity chromatography의 원리로써 GST-fusion protein이 사용된다.
기질과 강한 친화력을 가진다는 것에 착안해서 유전자에 의해서 발현되어 자신이 정제하고자 하는 단백질 앞에 fusion protein을 만들어 정제를 하는 용도에 많이 사용된다.
③ 필수 요소 : OriC, 제한효소자리(multiple cloning site), marker
- tac promoter: trp promoter와 lac promoter의 hybrid promoter로 E. coli의 RNA polymerase의 σ-factor에 의해서 인식된다.
- GST (glutathione S-transferase : tac promoter 뒤에는 GST 유전자가 있고 바로 뒤에 MCS가 자리하고 있어 제한효소로 자르고 insertion 시키는 유전자가 GST와 fusion 될 수 있다. GST는 glutathione과 affinity chromatography를 이용하여 쉽게 정제될 수 있게 한다.
- operator : tac promoter down stream에 lac I가 붙을 수 있는 operator가 있어 IPTG에 의해 induction 가능
참고 자료
http://blog.daum.net/kimuks
http://dasan.sejong.ac.kr/~yjlee
https://ko.wikipedia.org
