Competent cell의 제조

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최초 등록일: 2012.11.10
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competent cell 제조 실험 보고서

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1.실험제목: Competent cell의 제조 2.실험날짜: 10월 25일 맑음3.실험목적: E.coli에 plasmid 또는 phage DNA를 transformation함으로써 내부의 DNA 또는 phage를 증폭, 분리하여 관찰하기 위한 host를 키우기 위한 것이다.
4.실험원리
※Competent cell의 제조
-박테리아를 형질전환(transformation)시키는 대부분의 방법은 수많은 과학자들이 경험적 으로 정리한 것이며 그 기전은 정확히 알려지지 않았다. 현재 실험실에서 competent cell을 제조하는 방법으로 다음과 같은 두 가지가 주로 사용된다. 첫 번째 방법은 fresh froze
n방법으로 DH1, DH5, MM294등의 E. coli를 높은 효율(5 ×108 transformed colonies/μg of supercoiled DNA)로 형질전환시킬 수 있으며, strain에 따라서 효율이 떨어지기도 하지만 사실상 거의 모든 경우에 사용할 수 있는 방법이다. 보다 간단한 방법인 두번째 방법은 calcium chloride를 이용하며 대략 107 transformed colonies/μg of supercoiled DNA의 효율을 가지고 있다. ※Calcium chloride를 이용한 competent cell의 제조 -이 방법은 Cohen등에 의해 개발된 방법을 약간 변형시킨 것으로, 효율은 Hanahan 방법에 비해 떨어지나 간편하고 보통 cloning목적으로 사용하기에는 충분하므로 실험실에서 많이 사용되는 방법이다. 이 방법으로 만든 competent cell은 시간이 오래 지날수록 형질전환 효율이 다소 감소하긴 하지만 -70°C deep freezer에 보관하여 사용할 수 있다. 5.실험기구: ET-tube, 파이펫, 원심분리기. 얼음, tube

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없음

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