서강대학교 현생실2 Competent cell과 PCR, 전기영동, Gel purification

소개글

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목차

I. Abstract

II. Introduction

III. Materials and Methods
1. Basic Laboratory Techniques
2. Competent cell, Transformation
3. PCR
4. Agarose gel electrophoresis, Gel purification

IV. Data & Results
1. Competence cell의 형질전환
2. PCR, 전기영동 및 Gel purification

V. Discussion

본문내용

 Abstract
이번 실험에서는 총 4회에 걸쳐 LB배지제작, 수용성 세포를 만들기 위한 시약을 제조하고, Competent Cell을 통해 형질전환을 진행하였으며, PCR을 통해 특정 DNA를 증폭하여 Agarose gel electrophoresis를 통해 Band를 확인하였다. 전기 영동 과정에서는 순수한 DNA band만을 관찰하기 위해 Gel purification도 진행했다. 기본적으로 사용될 배지와 수용성 세포인 Competent cell을 만들기 위해 필요한 시약을 제조했다. 2주차 실험에서는 이 시약과 배지를 가지고 Competent cell을 만들었다. Competent cell은 외부 DNA으로부터 정보를 받아들이기 쉬운 상태의 Cell로 형질전환을 하기 위해 사용되었으며 냉각과 열을 가해 직접 만들었다. PCR과정을 통해 원하는 DNA의 단편만 증폭하였고, 배지에 자란 colony의 개수를 통해 형질전환 효율을 계산했는데, 20개의 colony 개수를 통해 구한 결과는 2*106 CFU/ug가 나왔다. 형질전환 효율을 가졌다. 또한 Agarose gel에서 전기적인 힘을 통해 DNA를 분리시키는 전기영동을 통해 DNA의 Size를 관찰했다. 전기영동의 결과 약 800bp의 size를 가진 DNA가 관찰되었다. 이외에도 형질전환의 효율을 높이는 방법과 Ampicillin의 배양에서 주의해야할 특정 조건에 대해 알아보았다.

 Introduction
배지는 C, N이나 무기염류 등으로 구성된 세포를 배양하기 위한 것으로, 여러 조건에 따라 나뉘게 된다. 물리적성질, 배지 조성, 목적 세 가지에 따라 나뉘게 되는데, 우선 액체, 고체 배지로 물리적 성질에 의해 나뉘며, 조성에 따라 합성, 복합, 최소배지로 나뉘게 된다. 또한 선택, 비선택배지로 목적에 따라 나뉘게 된다. 액체 배지(Liquid medium)은 liquid broth라고도 불리며 대량증식에 사용한다.

참고 자료

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