Competent Cell (Com.Cell, C.Cell)의 제조방법 / Inoue method / 수용성세포 제조법

소개글

Competent Cell(수용성세포)의 제조방법을 상세하고 자세하게 기술했습니다.
Competent Cell 제조시 주의사항, 꿀 Tip, 수율 높이는 방법을 기술했습니다.
Inoue method와 CaCl2 method를 비교했습니다.
SOB Buffer와 TB Buffer의 제조법을 나열하고 비교했습니다.

대학원에서 사용하던 방법입니다.
대학교 수업에서 부터 대학원 실험까지 광범위하게 사용하시길 바랍니다.

목차

1. Competent Cell 제조시 주의사항 및 꿀 팁
2. Competent Cell 제조법의 비교(Inoue method와 CaCl2 method)
3. Competent Cell 제조방법, 실험방법
4. SOB Buffer와 TB Buffer의 제조법 및 비교

본문내용

1. 5mL LB broth 두 곳에 E.coli 20ul씩 접종해 배양한다. 37℃, 12h, 180rpm (총 10mL)
2. 250mL LB broth에 전 배양액 10mL을 붓고 본 배양한다. 18℃, 18h, 160rpm (원래 SOB broth에 배양해야 하지만 LB broth도 상관 없다고 답변받음.) 12~15h 이후부터 OD를 측정하여 OD값이 0.6이 될 때 stop.
3. ice에 10분간 박아둔다. (이 과정은 모든 com cell 제조시 매우중요)
4. 4℃, 10min, 2500 x g centrifuge (모든 과정은 정확하고 빠르게 해야 하므로 대용량용기를 사용했다. 500mL)
5. Cell down된 500mL centrifuge 용기의 배지상등액을 버리고 차갑게 해둔 TB buffer 80mL를 넣고 voltexing해서 충분히 resuspend 해준다.
6. ice에 10분간 박아둔다.
7. 4℃, 10min, 2500 x g centrifuge

참고 자료

없음