Component Cell

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) Competent Cell
2) Competent Cell 종류
3) Competent Cell 제조 원리
4) Competent Cell의 이용
5) 실험 시 주의사항

4. 시약 및 기구
1) 시약
2) 기구
3) 준비

5. 실험 방법

6. 참고사항
1) gylcerol의 역할
2) CaCl₂의 역할
3) LB broth(Luria-Bertani broth)
4) Tris Buffer saline(TBS)
5) Shaking incubator
6) Autoclave(고압멸균)

본문내용

(1) Competent Cell
Competent cell이란 수용성 세포라고 불리며 DNA를 삽입할 수 있도록 처리한 즉, 외부의 DNA를 받아들일 수 있도록 물리적, 화학적으로 처리한 세포를 말한다. 이러한 특징으로 인해 형질전환능력을 가진 세포라고 할 수 있다. 그렇기 때문에 플라스미드(plasmid)에 삽입된 DNA의 전달, 발현 및 유지를 위한 유전자 클로닝에 일상적으로 사용된다. DNA를 삽입할 수 있도록 하는 물리적, 화학적 방법으로는 전기 충격을 가해 DNA를 세포 안으로 전달시키는 방법과 열을 이용한 방법, CaCl₂, RbCl₂ 등을 처리하는 방법 등이 있다.

(2) Competent Cell 종류
① JM109
재조합 클로닝 및 서브 클로닝을 위한 즉시 사용 가능한 유능한 E. coli 세포
• 셀은 바로 사용할 수 있으며 준비 시간이 필요하지 않음
• 변환 효율성 보장
• 원치 않는 재조합 사건 (recA– 돌연변이)에 대한 걱정이 없으며 miniprep DNA (endA– 돌연변이)의 뉴클레아제 캐리오버가 없음

② DH5α
DH5-알파 셀(DH5α, DH5a, DH5-alpha Cells)은 형질 전환 효율을 극대화하기 위해 제작된 대장균 세포이다. DH5α 이름은 미국의 생물학자 더글라스 하나한(Douglas Hanahan)에서 유래한다. 세포는 플라스미드 삽입을 돕는 3개의 돌연변이[1] recA1, endA1 및 청색 백색 스크리닝 을 가능하게 하는 lacZM15에 의해 정의된다. 세포는 수용성상태(competent)이고 종종 원하는 플라스미드를 삽입하기 위해 염화칼슘 형질전환과 함께 사용된다.

참고 자료

https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5894228&cid=61232&categoryId=61232
: competent cell, Electroporation, 실험 시 주의사항
https://ko.wikipedia.org/wiki/DH5-%EC%95%8C%ED%8C%8C_%EC%85%80 : E. coli (DH5α)
https://ko.wikipedia.org/wiki/Lb%EB%B0%B0%EC%A7%80 : LB broth
https://en.wikipedia.org/wiki/Tris-buffered_saline : Tris-HCl
https://www.addgene.org/protocols/create-glycerol-stock/ : glycerol의 역할
https://en.wikipedia.org/wiki/Calcium_chloride_transformation : CaCl₂의 역할
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=3587675&cid=40942&categoryId=32330 :
LB Broth
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=422747&cid=60261&categoryId=60261 :
Shaking incubator
http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=16&sst=wr_hit&sod=desc&sop=and&page=1 : competent cell 제조 원리
https://ko.wikipedia.org/wiki/%EA%B3%A0%EC%95%95%EB%A9%B8%EA%B7%A0
: Autoclave(고압멸균)
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=tritopsh2566&logNo=40153155580&proxyReferer=https:%2F%2Fwww.google.co.kr%2F : Tris-HCl
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=3393149&cid=60289&categoryId=60289
: 대장균과 pH
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/EC0114#/EC0114 : BL21(DE3)
https://www.promega.kr/products/cloning-and-dna-markers/bacterial-strains-and-competent-cells/pro-5_alpha_-jm109-and-hb101-competent-cells/?catNum=L2005
: JM109
https://bio-protocol.org/bio101/e76 : RbCl method
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5646963&cid=62861&categoryId=62861
: 형질전환
https://bio-protocol.org/bio101/e143 : Inoue Method