[생화학] 효소 활성 결과

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생화학 효소활성 결과 실험 과정 결과 및 디스커션입니다.

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본문내용

1.title : 맥아의 산성 탈인산가수분해효소의 활성 측정
2.Date : 2010. 11. 8
3.Name :
4.Reagent & apparatus
Lowry시약, microtube, BSA standard(mg/ml) folin ciocalteau시약, ELISA Reader, micro plate D.W 1M 초산 완충용액(pH 5.7), 25mM MgCl2, 0.5M KOH, 20mM p-nitrophenylphosphate,timer water bath, 동동이
5.method
효소 측정
① 시험관에 각 효소 분획 100ul씩 가했다. (blank: 증류수 100ul)
② 1M 초산 완충액 250ul, 25mM 100ul를 가했다.
③ 20mM p-NPP 50ul를 10초 간격을 두고 가한 후 혼합했다.
④ 30℃의 항온수조에서 20분간 항온처리했다.
⑤ p-NPP를 가한 순서대로 0.5M KOH 1ml씩 10초 간격으로 가하여 반응을 중지시켰다.
⑥ 405nm에서 흡광도를 측정했다.
⑦ p-NP의 몰흡광도 계수를 사용하여 p-NP의 몰농도를 계산했다.
⑧ 구해진 효소활성에 단백질량을 나누어 specific activity를 구했다.
효소활성 (U) : △OD/ 18.8 × 0.5 / 0.1 ÷ 20
△OD : 측정된 OD값
18.8 : p-NP몰흡광계수
0.5 : 시약 + sample양
0.1 : sample양
20: 반응시킨 시간
Special activity (U/mg) : 효소활성/(단백질량/5)
(단백질량은 mg/ml 이며, 효소 활성은 U/200 ul이므로 단백질량을 5배 나눠 동일한 부피에서 계산한다.)

참고 자료

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