E.coli의 형질전환과 배양

목차

1. 실험제목
2. 날 짜
3. 이 름
4. 실험목적
5. 실험원리
6. 시약 및 기구
7. 실험 방법

본문내용

5. 실험원리
(1) 미생물배양과 미생물배지
1) 배양
- 생물체(주로 미생물 및 발생중인 동식물의 배)나 생물체의 일부(기관, 조직, 세포 등)를 적당히 인공적으로 조절한 환경조건에서 생육시키는 일
- 배양세포는 실험동물의 한 기관에서 얻은 세포의 성장으로부터 유래된 것으로, 세포 배양은 조직의 일부분을 무균적으로 떼어 내, 효소로부터 세포 간 연결물질을 분해하여 유리시킨 현탄액을 병이나 페트리 접시와 같은 편편한 밑 부분에 도말하는 것이다. 일반적으로 세포는 유리표면에 부착할 수 있는 당 단백질성 물질을 생산하는데 이 때 글라스나 페트리 접시에 부착한 세포의 엷은 층, 즉 단충에 적당량의 배양액을 붓는다.
2）배지
- 미생물이나 동식물의 조직을 배양하기 위하여 배양체가 필요로 하는 영양물질을 주성분으로 하고, 다시 특수한 목적을 위한 물질을 넣어 혼합한 것이다.

< 중 략 >

7. 실험 방법
(1) 배지만들기
① 고체배지: 250 mL 삼각 플라스크에 LB broth 2.5 g + 증류수 100 mL + Agar 1.5 g
액체배지: 250 mL 삼각 플라스크에 LB broth 1.3 g + 증류수 50 mL
덩어리가 잘 보이지 않을 때까지 잘 흔들어 녹여준다.
② 250 mL 삼각 플라스크 2개의 입구에 각각 은박지로 입구를 덮는다.
③ 고온, 고압으로 멸균시키기 위해 121 ℃, 2 hr 설정으로 autoclave 한다.
☞ Check: 압력밸브가 잠겼는지 확인 후 Autoclave 내에 증류수를 열선까지 일정량 채운다.
→ 보통은 setting이 다 되어 있으므로 전원을 켜고 sample을 넣고“start”버튼을 2번 누르면 시작
☞ Autoclave 하는 약 2 hr 동안 (2).실험 진행한다.
④ “삐~”하는 소리와 함께 LCD 창에 "END"가 보이고 압력이 0.5 이하를 가리키면 뚜껑을 오픈하여 꺼낸다.
☞ END"가 뜨기 전에 오픈은 절대 금물!

참고 자료

없음