분자유전학실험레포트(A+)_DNA ligation and E. coli transformation. Ligase 활성 온도, Vector와 insert 농도 계산. 형질전환한 E. coli의 배양결과를 통한 ampicillin 내성 확인(사진有). BL21 균주와 DH5a 균주의 차이점, colony의 DcHsp17.7 유전자 포함 여부 확인 방법.

소개글

"분자유전학실험레포트(A+)_DNA ligation and E. coli transformation. Ligase 활성 온도, Vector와 insert 농도 계산. 형질전환한 E. coli의 배양결과를 통한 ampicillin 내성 확인(사진有). BL21 균주와 DH5a 균주의 차이점, colony의 DcHsp17.7 유전자 포함 여부 확인 방법."에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials
Ⅳ. Chemical reagent & apparatus
Ⅴ. Methods
Ⅵ. Results
Ⅷ. References

본문내용

Ⅰ. Abstract

transformation을 통하여 유전자가 발현하는 단백질의 역할을 알 수 있으며, 특히 Escherichia coli를 사용한 transformation은 특정 서열을 다량 복제하기 위해서도 이용한다. 본 실험은 pET11a를 vector, DcHsp17.7을 insert로 하여 ligation을 진행한 plasmid를 이용하여 transformation한 E.coli가 ampicillin이 함유된 배지에서 생존할 수 있는지를 확인할 목적으로 진행하였다. vector와 insert의 몰비율은 1:3으로 하였으며 ligation mixture 3ul를 사용하였다. control의 경우 ligation mixtrue대신 동량의 D.W를 넣어주었다. 형질전환된 E.coli를 SOC medium 배지에서 1시간 배양한 후 ampicillin 함유 배지에 도말하였다. control을 도말한 petri dish에서는 colony가 한 개도 나타나지 않았으며 ligation plasmid의 petri dish에서는 dish 전체에 빽빽하게 colony가 형성되었다. ligation mixture로 transformation한 E.coli는 ampicillin에 내성임을 알 수 있다. transformation한 결과 매우 많은 colony를 형성한 것으로 보아 E.coli를 형질전환하여 복제하는 기술은 재조합 DNA를 대량으로 증폭시키는데 매우 중요하다 할 것이다.

Ⅱ. Introduction

1. DNA ligation

Fig.1 Cut Plasmid와 Cut Insert가 DNA ligase에 의해 결합하는 과정

DNA Ligation은 두 가닥 이상의 끊어진 DNA 조각을 DNA ligase (DNA 연결효소)를 이용하여 연결시키는 방법으로, 한 DNA 조각의 3‘ hydroxyl group과 다른 DNA 조각의 5’ phosphoric acid 사이에 phosphodiester 결합이라는 강력한 공유결합을 이룬다.

참고 자료

http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/biology/blue-white-screening.html
http://www.genomics.agilent.com/article.jsp?pageId=472&_requestid=782630
http://biochem.web.utah.edu/hill/links/pET11a.pdf