plasmid DNA purification 예비 보고서

소개글

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목차

Ⅰ. 실험목적

Ⅱ. 실험원리
1. 플라스미드 (Plasmid)
2. 플라스미드 정제 (Plasmid Purification)
3. 전기영동
4. 전기영동의 종류
5. DNA 전기영동의 기본원리
6. 전기영동 장치의 구성
7. Buffer및 이동에 영향을 주는 요인

Ⅲ. 시약 및 기구
1.시약
2.기구

Ⅳ. 실험방법
1. Preparation
2. DNA purification

본문내용

Ⅰ. 실험목적
-Plasmid의 원형을 유지하려는 구조적 특성을 이용하며 alkaline lysis prep method를 이용하여 plasmid DNA를 분리해본다.
-DNA Purification을 한 후 Agarose gel 전기영동을 통해 DNA를 크기별로 분리하여 확인한다.

Ⅱ. 실험원리
1. 플라스미드 (Plasmid)
1) 플라스미드란?
DNA에는 Plasmid DNA와 Genomic DNA가 있다. 진핵세포는 핵이 구분되어 있지만 원핵세포는 핵이 따로 없고 세포 안에 genomic DNA가 흩어져 있다. Genomic DNA는 세포의 핵 안에 있는 DNA 전부를 일컫는다.
Plasmid DNA는 생장에 필수적인 염색체(chromosome) DNA에서 물리적으로 분리되어 독립적으로 복제하는 대표적인 에피솜(episome) DNA 분자이다. 원핵세포 내에서 세포 내 염색체와는 독립적으로 복제하는 DNA분자로 보통 30개 이하의 적은 수의 유전 정보를 지니기 때문에 그 크기가 염색체에 비해 매우 작다. plasmid는 복제를 통해 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 그러나 Plasmid를 지니고 있을 경우 생명 유지에 도움을 줄 수 있는데, 대표적 예로 항생제 내성 유전자가 있다.

2. 플라스미드 정제 (Plasmid Purification)
1) 플라스미드 정제
Plasmid Purification이란 플라스미드 또는 재조합 플라스미드 DNA를 대장균에서 배양한 후 증폭된 Plasmid를 추출하고 정제하는 방법이다. 플라스미드를 대장균에 형질 전환시켜 도입하면 이 대 장균을 순수 배양하여 증폭시켜 손쉽게 플라스미드를 분리하고 정제할 수 있다. 염색체 DNA와 분리하는 핵심 원리는 변성(denaturation)된 DNA가 renaturation(annealing) 되는 속도의 차이를 이용하는 것인데, 염색체 DNA처럼 크거나 분리과정에서 선형으로 전환되는 DNA는 renaturation되는데 오랜 시간이 걸리는 데 비해, 플라스미드처럼 작은 환형 DNA는 renaturation이 상대적으로 빨리 이루어진다.

참고 자료

없음