Bradford assay

소개글

Bradford assay에 관련된 생화학실험 레포트 입니다.

목차

￭ Principle
￭ Materials
￭ Procedure
￭ Results
￭ Discussion
￭ Reference

본문내용

￭ Principle
광원에서 빛이 프리즘(monochromator)을 통과한 후 sample로 입사할 때 Detector로 sample을 통과한 후의 빛의 양을 측정하는 것을 Single beam, 빛이 프리즘을 통과한 후 샘플 및 비교대상(Reference or blank, 측정하고자 하는 물질만 없는 대조군)에 입사할 때 샘플 및 비교대상을 통과한 후의 빛의 양을 detector 1과 2로 각각 측정하는 것을 Double beam 이라고 한다. 이번 실험에서는 spectrophotometer를 사용하여 400~700nm의 파장범위에서 샘플을 scan 했을 때 어떠한 결과가 나오는지 확인한다. 실험에 앞서 다음의 Beer-Lambert 법칙을 알아둘 필요가 있다.

T(Transmittance) = I/I0
%T(Transmittance) = 100T
A(Absorbance) = -log(I/I0) = εLC
[ε= molar absorption coefficient(M-1Cm-1), L: path length(Cm), C: concentration(M)]

이번 실험에서는 Bradford assay method를 사용하는데 이 방법은 단백질에 특이적으로 반응하는 Bradford 시약을 사용하여 실험을 빠르고 쉽게 수행할 수 있다. 다양한 물질에 대해서 보편적으로 사용할 수 있으며, 염색액과 결합한 단백질도 비교적 안정하다는 장점이 있다. 그러나 흡광도에 따라 실험결과가 달라질 수 있다는 단점이 있다. 따라서 흡광도를 0.5 정도에 맞춰주는 것이 가증 정확한 실험결과를 얻을 수 있는 방법이다.

참고 자료

Modern Experiment BIOCHEMISTRY 3E, Rodney Boyer, Benjamin Cummings, p 43~44
Cell and molecular biology 5E, karp, Wiley , p
기기분석 , 장용순, 감삼우, 기호와 책 , p37 ~ 66