PCR, 전기영동(electrophoresis)

소개글

일반생물학/생물학 실험 A+ 입니다.

목차

1. 실험목적
2. 실험방법
3. 실험결과
4. 토의

본문내용

1.실험목적 : 1) 특정 DNA 부위를 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를 증 폭 시킨다.
2) 종류가 다른 DNA단편을 Agarose-gel 전기영동을 통해서 크기를 분석해본다.
3) Agarose-gel 전기영동 장치의 사용법을 숙지한다.
2.실험방법 : (1) PCR
*일반적으로 PCR반응은 total volume 50μl로 수행함.
① PCR tube에 dNTPs buffer 4 μµl와 reaction buffer 5 μl를 넣는다.
② Template DNA 1 μl를 넣고 forward, reverse primer를 각각 1μl 씩 넣는다.
③ DNA polymerase 1 μl를 넣는다.
④ 증류수 37 μl를 넣고 잘 pipetting 해 준다.
⑤ PCR machine의 well에 tube를 넣고 반응시킨다.

<중 략>

DNA의 구조를 보면 DNA의 골격에 해당하는 부분이 당과 인산기로 이루어진것을 알수 있는데 이 인산기는 당의 3‘ 부분에 연결되게 한다.
dNTP의 경우 인산이 당의 3‘에 붙을 때 dNTP 당의 3’ 부분의 hydroxyl group과 인산에스테르 결합을 하면서 인산과 당이 연결되게 되는데 여기서 인산에스테르 결합이란 인산기와 hydroxyl group이 반응하면서 에스테르 결합을이루는 것으로 DNA의 경우에는 인산에스테르 결합이 두 개가 나오기 때문에 인산다이에스테결합이라고도 한다. 그러나 ddNTP의 경우에는 hydroxyl group이없기 때문에 인산에스테르 결합이 일어날 수가 없어서 인산기가 당과 결합하지 못하고 DNA골격을 이루지 못하게 된다.

참고 자료

없음