분자생물학실험 (분생실) PCR (Polymerase Chain Reacion) 레포트 입니다.

소개글

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목차

(1) 서론
1) 실험날짜(Date)
2) 실험목적(Purpose)
3) 이론적배경(Principle)

(2) 재료 및 방법
1) 실험재료(Materials)
2) 실험방법(Method)
(3) 실험결과(Result)
(4) 논의(Discussion)

본문내용

2) 실험 목적 (Purpose)
- PCR의 원리와 방법을 알아본다.
- Electrophoresis의 원리와 방법을 알아본다.
- 실험을 통해 각 sample의 mutant와 wild type을 구분해본다.

3) 이론적 배경(Principle)
- PCR의 정의 및 역할 ; PCR은 Polymerase Chain Reaction의 약자로 DNA의 특정 부위를 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법이다.
- PCR이 이용되는 실험 ; Probe로 사용할 목적으로 cloning된 이중가닥 DNA 증폭, 적은 양의 mRNA로부터 특정 cDNA의 cloning, DNA sequencing, 돌연변이 검사, 병원성 바이러스 및 박테리아 검출, 유전자의 footprinting, 특정 부위에 돌연변이를 일으키는 유전자의 제조
- PCR에서 필요한 재료; template DNA(증폭 대상이 되는 DNA), 한 쌍의 primer(증폭할 부분을 잡는 짧은 oligonucleotide), dNTP,(유전자를 합성하는 재료가되는 nucleotide), Taq polymerase (열에 강한 유전자 합성 효소)
- PCR의 원리 ; DNA를 이중나선을 풀고 원하는 target 양 끝에 Primer을 붙여 dNTP를 이용해 DNA Polymerase로 원하는 부위를 증폭하는 것이다.
- PCR의 방법
가. DNA의 변성 (Denaturation) ; 90~96’C로 가열하여 double strand DNA(dsDNA)를 single strand DNA(ssDNA)로 분리시킨다.
나. Primer의 결합 (Annealing) ; Tm온도(DNA strand가 1/2 denature 되었을 때의 온도 ,보통 50~65’C)에서 진행하여 primer을 부착한다.
다. DNA 합성 (Polymerization) ; 70~74’C에서 시행하며 1kb마다 1분 정도의 시간을 배당한다.
라. 위 과정을 반복하여 원하는 DNA 부분을 증폭한다.

참고 자료

Asubel, Fredirick M / Current Protocols In Molecular Biology / Wiley / 2003 / pp2280-2288
Das, Surajit, and Dash / Microbial Biotechnology – a Laboratory Manual for Bacterial Systems / SpringerVerlag / 2015 / pp22-29