미생물 플라스미드

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미생물 플라스미드

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4. 실험목표 : Mini prep의 원리를 이용하여 Plasmid DNA를 분리해낼 수 있다.
5. 실험이론 및 원리
➀ E.Coli세포에서 Plasmid DNA 와 Chromosome DNA를 분리하여 Plasmid DNA를 추출하는 원리.
단도직입적으로 말해서, Chromosome DNA와 Plasmid DNA의 구조적 차이라 할 수 있다.실험 과정에서, Solution Ⅰ, Ⅱ로 인해 플라스미드와 chromosome DNA가 세포내에서 외부로 방출된다. 이 때 NaOH는 DNA를 single strand로 denature시킨다.
denature 과정에서, Chromosome DNA는 쉽게 single strand로 풀어지는 반면, plasmid DNA는 supercoil형태이기 때문에, alkaline condition에 대한 저항성이 있어서 쉽게 풀어지지 않는다.
따라서, plasmid DNA가 alkaline condition에 저항하여 intact form으로 solution 상에 녹아있는 반면에, Chromosome DNA는 denature되어 single strand로 풀린다.
그 후 Neutralization buffer를 첨가해 중성 환경으로 복원시키면 linearized 된 chromosome DNA는 다시 dsDNA로 돌아가기 힘들게 되고 (너무 길게 엉겨있어서 제 짝을 찾기가 만만치 않다. 쉽게 말해 부피가 커서 복원이 힘들다.) single strand DNA는 potassium acetate를 넣는 순간 불용해성을 띄고 침전되어버린다.
따라서 plasmid DNA만 추출이 가능하다.

참고 자료

Brock 의 미생물학 12판. 라이프사이언스
http://blog.naver.com/monet_vera?Redirect=Log&logNo=50079110424
http://blog.naver.com/pow1987?Redirect=Log&logNo=51856451

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