[생화학 실험] PCR-mediated mutagenesis

소개글

저희 학교 조교의 주문대로 Discussion에 중점을 두며 열심히 썼습니다. (고찰 - A4 두 쪽 분량, 글자 point ; 10)
A+ 받은 보고서이니 참고하시면 도움 되실 겁니다~

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재
7. 실험방법
8. 고찰
9. 참고문헌

(실험 결과는 조교님께서 올려주시는 PCR band 사진이므로 생략하였습니다.)

본문내용

8. 고찰
이번 실험은 PCR를 이용하여 DNA 상의 특정 sequence를 실험자가 원하는 다른 sequence로 치환하여 T-vector를 이용하여 ligation 및 transformation한 후, mini-scale preparation을 통해 cloning의 성공 여부를 확인하는 실험이었다. Cloning에 성공한 transformed bacteria는 이를 먹이로 하는 animal model(e.g. C.elegans)의 유전형질을 변환시킬 수 있으며 transgenic animal model이 나타내는 phenotype을 관찰함으로써 해당 유전자의 기능을 연구할 수 있다. 따라서 이와 같은 cloning은 세포 내의 특정 유전자를 이해하는 연구의 시작이 되는 중요한 실험 기술이며 여기에 지난 2주 동안의 실험에 대한 의의가 있다고 생각한다.
우선, 이번 실험에서 사용된 시약들의 주요 기능을 살펴보면 다음과 같다. PCR buffer(10x Taq pol buffer)에는 , , 등이 포함되어 있다. 는 primer가 template DNA에 결합하는 능력, template 및 PCR 산물의 변성온도, product specificity, dNTP와의 결합, Taq DNA polymerase의 활동성, 그리고 primer-dimer artifact 형성에 영향을 준다. 모든 thermostable DNA polymerase는 를 enzyme activity를 위해서 필요로 하는데, EDTA와 같은 chelating agent나 와 같은 negatively charged ion은 을 붙잡기 때문에 template DNA에 포함되어 있으면 반응 효율이 떨어진다. 은 primer가 target DNA에 결합하는 것을 도와주고, Taq polymerase의 반응율을 높여준다. 는 Taq DNA polymerase를 안정화시키는 데 사용된다.
(중략)

참고 자료

1) 생화학 실험(2) 전반부 실험교본, p. 45～51
2) 실험 생화학 개정 3판, 한국 생화학회(1997)
3) http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/PCR.php