[생화학 실험보고서] PCR-mediated Mutagenesis

소개글

Primary PCR에서 특정 gene의 주변 sequence를 증폭시키고, elution을 이용하여 원하는 증폭된 sequence만을 얻은 뒤 secondary PCR에서 증폭된 sequence를 ligation시켜 deletion mutagenesis를 수행하는 실험입니다.

목차

1. 목적
2. 원리
3. 시약 및 기자재
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

2. 원리
1) PCR이란?
i) PCR (polymerase chain reaction)은 DNA polymerase 반응을 연속적으로 수행하여 DNA를 증폭하는 방법이다.
ii) PCR은 기본적으로 세 단계(denaturation, annealing, extension)로 구성되며 이를 25 ~ 30번 반복 수행하면서 최고 약 1백만 배까지 (i.e., 225 = 106) template DNA의 증폭을 얻게 된다.
95 ℃) single strand로 분리한다.
□ Step 2 : Annealing step : DNA primer가 DNA에 결합하는 단계(45 ~ 55 ℃)
□ Step 3 : Extension : DNA polymerase에 의해 DNA 합성이 일어나는 단계(일반적으로 72 ℃)
iii) 생명과학 뿐 아니라 임상의학연구, 특히 법의학(forensic medicine)에 획기적인 영향을 주었으며, 그 공로로 개발자인 Dr. Mullis가 노벨상을 수상함.
iv) 개발 초기(1980년 경)에는 매우 제한적으로 사용되었으나 1980년 중반 아래의 세 가지 기술이 개발되어 PCR이 비로소 실용화되어 널리 사용되기 시작함.

참고 자료

1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
2) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.
3) http://en.wikipedia.org/wiki/