7주차_polymerase chain reaction
- 최초 등록일
- 2023.08.31
- 최종 저작일
- 2023.05
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목차
I. Purpose
II. Theory
1. Polymerase chain reaction의 원리
2. Denaturation (step 1)
3. Annealing (step 2)
4. Extension (step 3)
5. PCR에 사용되는 Reagent
III. Apparatus/reagent
IV. Procedure
1. PCR (Bioneer Top DNA Polymerase protocol)
2. Agarose Gel Electrophoresis
V. Data&Results
VI. Discussion
본문내용
Purpose: PCR의 원리를 이해하고, 실제로 PCR을 수행해본다.
Theory
1. Polymerase chain reaction의 원리
Polymerase chain reaction(PCR)은 1983년 미국 생화학자 kary mullis에 의해 DNA를 효율적으 로 조작하기 위해서 발명된 실험기법이다. PCR을 이용하면 적은 양의 sample을 이용해서 target DNA sequence를 빠르게 증폭할 수 있기 때문에, 유전자 검사, 연구, 분석 등 생화학 실 험의 기초가 된다. 일반적으로 PCR에서 증폭되는 DNA fragment는 0.1~10kbp지만, 40kbp까지 증폭 가능한 경우도 있다. PCR에는 template으로 사용될 sample, DNA polymerase, dNTP, primer, buffer 등이 이용되는데, 이 중 dNTP는 substrate로써 DNA가 증폭될 수 있는 최대 양 을 결정한다. PCR은 DNA 이중 나선을 분리하고, primer가 결합한 후 polymerase에 의해 새로 운 DNA strands가 합성되는 3단계로 이루어진다. PCR에서 primer의 결합과 polymerase의 작 용은 모두 DNA가 A-T, G-C의 상보적인 염기쌍을 형성하는 성질을 이용한다. PCR의 3 단계는 95도, 54도, 72도에서 최적으로 일어나기 때문에 PCR이 정상적으로 진행되기 위해서는 reactant에 반복되는 heating-cooling의 온도 변화를 주는 thermal cycling이 필요하다. PCR은 주로 작은 thermal cycler에 의한 온도 변화가 잘 전달될 수 있도록 열전도성이 높은 reaction tube에서 진행된다. PCR에서는 기존의 DNA 2가닥에 의해 형성된 새로운 가닥도 다음 reaction cycle에서는 template으로 작용할 수 있기 때문에 n번의 cycle 후에 2 n배로 DNA가..
<중 략>
참고 자료
Jeremy M.Berg, Biochemistry, 8th, W. H. Freeman, 2015, pp613-620. 841-850
B. Alberts, Molecular Biology of the Cell, 6th, Garland Science, 2014, pp1021-1030, 241-249