PCR purification 및 Electrophoresis 실험
- 최초 등록일
- 2022.06.13
- 최종 저작일
- 2019.09
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소개글
"PCR purification 및 Electrophoresis 실험"에 대한 내용입니다.
목차
1. Title
2. Date
3. Object
4. Introduction
4-1. PCR purification
4-2. Binding step
4-3. Washing step
4-4. Elution step
5. Materials & Methods
5-1. Materials
5-2. Methods
6. Results
6-1. Results figure
6-2. Results 분석
7. Discussion
본문내용
4-1. PCR purification
PCR(Polymerase Chain reaction) product 중, Target(DNA)를 제외한 조성성분(polymerase, buffer, dNTP, primer 등)을 제거하여 정제하는 과정이다. PCR purification을 제외한, 다른 실험에서 생성된 complex mixture로부터 목적으로하는 단일 타입의 물질을 분리하는 모든 과정을 purification이라 칭한다. 이러한 purification은 target과 관계 없이 Binding-Washing-Elution 단계로 구별된다.
purification의 종류로는 sublimation, crystallisation(결정화), Distillation(증류), Differential Extraction(차등 추출), Chromatography 등이 있으며, 이번 실험에서는 silica gel membrane을 이용한 purification을 실시한다. 이를 Spin column-based nucleic acid purification이라 한다.
4-2. Binding step
- 단계 설명
Binding step에서는 Column 내에 존재하는 silica gel과 binding buffer를 이용하여 DNA fragment를 silica gel에 고정시키고, 다른 성분을 centrifugation을 이용하여 분리하는 과정이다.
- Binding buffer 조성
purification에 이용되는 binding buffer의 경우, purification kit를 제조하는 제조사마다 해당 조성이 다르다. 해당 buffer의 조성 차에 의해 purification 효율이 달라진다.
Binding buffer의 기능은 silica gel membrane과 DNA 사이의 positive ion bridge를 형성하여 DNA를 silica gel memebrane에 고정시키는 역할을 한다.
참고 자료
Google. “PCR purification”
Google. “purification binding buffer”
Google. “purification washing buffer”
Google. “purification elution buffer”
Google. “purification elution dw”
Google. “charothropic agent 농도”
Google. “binding buffer가 고농도여야 하는 이유”
Google. “purification type”