cDNA synthesis and RT-PCR

줄기세포

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목적
: Testis 조직으로부터 추출한 RNA를 cDNA로 합성하고 PCR을 통해 증폭시킨 후 전기영동을 통해 확인해서 testis 조직이 target RNA를 발현하는지 확인한다.

서론
* Reverse Transcription PCR

RT-PCR은 세포나 조직 내의 RNA를 확인하기 위한 실험이다. 유전자의 intron과 exon을 확인하거나 특정 상황에서 세포나 조직 유전자의 발현 여부나 발현 정도를 확인하기 위해서는 DNA가 아닌 RNA를 확인해야한다. DNA를 확인하기 위해 DNA를 증폭시키듯이 RNA도 실험에 사용하기 위해 증폭을 시켜 충분한 양을 확보해야 한다. 하지만 RNA는 DNA와는 다르게 single strand 구조라서 불안정하고 일반적인 PCR은 RNA가 아닌 target DNA를 증폭시키는 방법이기 때문에 RNA를 cDNA로 바꿔주는 과정을 거치게 된다. 이 과정이 바로 reverse transcription이고 RT-PCR은 PCR에 reverse transcription을 거친 sample을 사용하는 것이다.
Reverse transcription 과정에 사용하는 효소는 reverse transcriptase이다. Reverse transcriptase는 retroviruses들이 자신들의 유전자를 복제하기 위해 사용하기도 하고 eukaryotic cells들이 telomeres를 확장하기위해 사용되어지는 효소다. Reverse transcriptase는 Howard Temin에 의해 발견되었고 David Baltimore가 murine leukemia virus와 Rous sarcoma virus로부터 추출해냈다고 한다.

참고 자료

“Reverse transcription PCR”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Reverse_transcription_polymerase_chain_reaction
“Reverse transcriptase”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Reverse_transcriptase
“[Dyne 10th 기초 실험방] RT-PCR법 – II. 역전사효소 반응”, 다인바이오
http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=12&sst=wr_hit&sod=desc&sop=and&page=1
“DNA, RNA 전기영동 관련제품 선택가이드”, TaKaRa
https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D057501
“TAE buffer(Tris acetate-EDTA)”, Micro giene
https://www.microgiene.com:9041/shop/item.php?it_id=1480481479&ca_id=90
“TBE Buffer (Tris-borate-EDTA) (10X)”, ThermoFisher
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/B52#/B52
“Ethidium bromide”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Ethidium_bromide
“Ethidium Bromide (EtBr) Dye for DNA and RNA Detection”, ThermoFisher
https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/nucleic-acid-gel-electrophoresis/dna-stains/etbr.html
“Nucleic Acid Electrophoresis Troubleshooting Guide”, ThermoFisher
https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/cloning/cloning-learning-center/invitrogen-school-of-molecular-biology/na-electrophoresis-education/na-electrophoresis-troubleshooting.html
“Ribonuclease”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Ribonuclease
“RNase WiPER™”, iNtRON BIOTECHNOLOGY
https://www.intronbio.co.kr:6002/intronbio_m/product/product_view.php?PRDT_ID=132

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