단백질 전기영동(SDS-PAGE) 결과 보고서

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목차

Ⅰ. 실험방법
Ⅱ. 실험결과
Ⅲ. 토의

본문내용

Ⅰ. 실험방법
1. 준비
30% acrylamide 용액 (29 : 1), 1M Tris-HCl(pH 8.8), 0.5M Tris-HCl(pH 6.8), 10% SDS, 10% APS, TEMED, 1x Running buffer, 5x Sample buffer, CBB staining solution. Destaining solution

2. 단백질 전기영동
(1) SDS-PAGE gel 제작
➀ 유리판에 gel을 casting 할 면을 ethanol/증류수와 kimwipes를 이용하여 깨끗이 닦는다.
➁ gel kit를 조립한다. (조교시범)
➂ 아래의 표대로 용액을 준비한다. (APS와 TEMED는 kit에 넣기 직전에 첨가)

④ Separating gel용액을 casting한 kit에 붓는다.
⑤ 마지막으로 붓고 나서 물 (n-butanol 또는 isopropanol을 사용해도 됨)을 맨 위에 1cm 정도 덮어준다.
⑥ 10-20분 기다린 후, 층이 잘 분리가 되고 직선으로 잘 굳어 있으면, 물을 제거한다.
⑦ Stacking 용액을 준비하여 마지막으로 APS, TEMED를 넣고 kit에 붓는다.
※ TEMED는 냉장고에 보관되어 있으며, 반드시 후드에서 사용하고 팁은 Fume hood에서 비닐에 모아 냄새가 빠진 후 버린다. 피펫을 너무 담그지 않고, 묻는 경우 바로 70% 에탄올 용액으로 닦아낸다.
⑧ 마지막으로 Comb을 제대로 꽂아 넣고 bubble이 들어가지 않도록 주의한다.
⑨ 최종적으로 굳은 gel은 well을 깨끗이 씻어서 전기영동을 준비한다.

참고 자료

없음