[생화학실험]BCA 분석법

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목차

1. 실험 이론 및 원리
2. 실험 기구 및 시약
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 토의 사항

본문내용

1. 실험 이론 및 원리
1.1. 서론
BCA분석법은 비색정량법의 일종으로 시료액 중의 아미노산과 시약의 반응에 의한 발색을 비색하여 목적으로 하는 화합물을 정량 하는 분석법으로 20가지 종류의 아미노산 중에 대표라고 할 수 있는 Cysteine(시스테인) 을 사용합니다. BCA분석법에서 사용되는 녹색의 발색시약은 시료액 속에 아미노산이 포함되어있을 경우 보라색으로 변색하며 시료액 속에 아미노산의 농도가 높을수록 더욱 진한 보라색이 됩니다.

1.2. 단백질 분석(Protein assay)
1.2.1. 단백질 정성 : 단백질은 시약과 반응하여 고유의 색을 나타냄 → 아미노산의 잔기, 카르복실기,아민기와반응 일반적으로 정량분석을 하기 전에 실시
1.2.2. 단백질 정량 : 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도 측정. 단백질의 본질, 단백질 시료 속 성분들의 본질, 정량분석의 신속도, 및 정밀도에 따라 방법 선택§colorimetric법(비색법), electrophoresis법(전기영동법) 으로 나뉨.

1.3. Lowly assay(Folin-Ciocalteau)
1.3.1. 원리
Lowry 등이 고안한 이 단백질 정량분석법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다. 단백질의 아마이드결합에 의한 구리이온의 환원을 토대로 측정하는 방식입니다. (→ )
1.3.2. 장점
① 매우 감도가 우수
② 비교적 간단, 1∼1.5시간 안에 가능§
③ 5ug/㎖정도의 단백질 양을 정량 할 수 있는 민감하다.
1.3.3. 단점
① 다른 단백질 간의 색의 차이가 광범위
② 단백질 농도의 색이 엄격히 비례하지 않음
③ 지질, phosphate buffer, 단당류등의 화합물이 반응에 방해
④ 절차가 복잡. 다른 화합물에 의해 간섭을 많이 받는다.
1.3.4. Lowry assay의 일종으로 개발된 method : BCA method, Peterson Method 등
1.3.5. Biuret법을 발전시킨 방법
1 단계 : Biuretreaction 알칼리 용액에서
2 단계 : Folin-Ciocalteureaction Cu+와 노란색을환원시켜 진한 청색으로 Cu2+와 단백질 팹티드간에 complex를 형성시켜서 Cu2+가 Cu+로 환원.

참고 자료

없음