Miniprep 결과레포트 [A+]

소개글

"Miniprep 결과레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 미리 배양한 세포, 대장균 E.coli를 이용하여 plasmid DNA를 분리하는 실험이다. plasmid DNA만을 분리하기 위해, 균주의 세포벽과 세포막을 부순 후 염색체 DNA를 변형시켜 제거해야만 한다. 이를 ‘Miniprep’ 과정이라고 하며 우리는 그 중에서도 대중적으로 이용되는 Alkaline lysis 방법을 이용한다. Labopass™ miniprep kit를 이용하여 5가지 buffer(S1, S2, S3, PW, EB)를 순차적으로 넣고, 원심분리 함으로써 쉽고 빠르게 균주에서 소량의 plasmid DNA를 얻을 수 있었다. 이후 plasmid DNA는 아가로스 겔 전기영동을 통해 DNA ladder(1kb)와 비교함으로써 크기를 확인할 수 있다.

2. Experiment
(1) 기구 및 시약
1.5mL microtube

Centrifuge

Micropipette
Spin column
/Collection tube

Labopass™
miniprep kit
Electrophoresis apparatus
Electrophoresis agarose
UV transilluminator
표 1. 실험 기구

+) TAE buffer (1X), DNA ladder (1kb), DNA loading star (6X)

- Labopass™ miniprep kit (S1 buffer, S2 buffer, S3 buffer, PW buffer, EB buffer) : Alkaline lysis를 기반으로 한 miniprep kit

 buffer의 역할

1. S1 buffer (세포현탁용액)
- Tris buffer: pH의 급격한 변화를 방지 (약 pH=8.0로 유지)
- EDTA: 세포벽의 강도에 영향 주는 제거하여 세포막 용해에 도움되며 DNase 활성에 필요한 를 제거하여 DNase의 활성을 억제시킴
- RNase : 세포 내 또 다른 핵산인 RNA를 제거하여 plasmid DNA의 순도를 높임
- Glucose: 삼투압을 유지시킴으로써 세포 외형이 유지된다. 세포가 완전히 깨지게 되면 염색체 DNA와 plasmid DNA의 구분이 어려워지기 때문이다.

참고 자료

일반생물학실험/한양대학교 분자생명과학과/한양대학교 출판부/p.57-58
Protocol-Plasmid Mini HP用080602