Plasmid DNA isolation from bacterial cell Miniprep 결과레포트 [A+]

목차

1. Abstract

2. Experiment
1) 실험 기기
2) 실험 시약
3) 실험 방법

3. Result

4. Discussion
1) Plasmid DNA의 형태
2) 그 밖의 오차의 원인

본문내용

1. Abstract
이번 실험의 목표는 DNA isolation 방법 중의 하나인 Miniprep을 이용하여 알칼리 조건 하에서 미생물(대장균)의 세포벽과 세포막을 부수고 유전자 재조합에 필요한 Plasmid DNA를 분리하는 것이었다. S1,S2,S3,PW,EB buffer를 이용해 plasmid DNA를 분리하였고, 실험의 결과 추출한 plasmid DNA의 크기를 측정하기 위해 전기영동을 진행하였다. 전기영동의 결과를 DNA ladder와 비교해보니 plasmid DNA의 크기는 4.0kbp로 측정되었는데, 실제 plasmid DNA인 8.0kbp와 차이가 나게 된 원인을 분석해본 결과, 다양한 plasmid DNA의 형태로 인한 것이라는 것을 알 수 있었다. 또한 축적으로 전기영동 결과에서 band가 여러 개 분포하는 이유와 이러한 여러 개의 band의 선명도가 각각 다른 이유를 생각해보았고, 더 정확한 실험 결과를 얻기 위한 방안을 찾아보았다.

2. Experiment
1) 실험 기기
(1) Spin column & collection tube
- Spin column과 collection tube가 결합된 상태에서 원심분리를 진행할 시료와 buffer가 혼합된 용액을 Spin column에 넣는다. 그리고 원심분리기를 작동하면 원심력에 의해 원하는 물질은 (이번 실험에서는 E.coli의 플라스미드 DNA) Spin column의 필터에 남고, 나머지 불필요한 물질과 buffer 용액은 밖으로 유출되어 collection tube로 모이게 되는 원리를 이용한다.

(2) 원심 분리기 (Centrifuge Separator)
- 원심분리기는 회전에 의해 생기는 원심력을 이용해 시료를 분획하는 장치이다. 균질액을 시험관에 넣고 원심분리기를 고속으로 회전시키면 입자의 크기와 밀도에 따라 물질을 분리할 수 있다.

참고 자료

김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON , page 186,210~212