중합효소연쇄반응 PCR (Polymerase Chain Reaction) 결과레포트 [A+]

목차

1. Abstract

2. Experiment
1) 실험 기기
2) 실험 시약
3) 실험 방법

3. Result

4. Discussion
1) 전기영동의 결과 Target DNA의 크기가 2.8kbp인 이유
2) 전기영동 결과가 희미하게 제대로 나오지 않은 이유

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 앞선 1번 실험의 Miniprep으로 얻은 plasmid DNA 속의 Target DNA를 PCR을 이용해 증폭시키고 그 증폭된 DNA의 크기를 전기영동으로 확인해 측정해보는 실험이다. PCR은 세포의 복제도구를 이용해 원하는 DNA의 특정부위를 단시간에 수 백만배로 증폭해 합성해내는 기술이다. 이번 실험에 사용한 plasmid DNA는 유전자 재조합된 pET-22b(+)였으며, 전기영동의 결과 전체적으로 결과가 희미하게 나와 정확히는 측정할 수 없었지만 가장 밝게 나온 부분을 DNA ladder와 비교하였을 때 정상상태 밴드의 측정 결과와 같이 대략 2.8kbp의 DNA를 얻은 것을 확인할 수 있었다. 마지막으로 Target DNA의 크기가 2.8kbp인 이유와 전기영동 결과가 희미하게 제대로 나오지 않은 이유에 대해서 고찰해보고 더 정확도 높은 실험 결과를 얻기 위한 방안을 생각해보았다.

2. Experiment
1) 실험 기기

(1) PCR machine
- PCR machine는 thermal cycler라고도 불리며, 입력된 시간에 입력된 온도를 유지하는 기능을 한다. 유전자를 증폭시키는 PCR을 수행한다.

(2) PCR tube
- PCR machine에 사용되는 아주 작은 크기의 0.2ml tube이다. 이번 실험에서 만든 PCR mixture을 넣어 PCR machine에 넣은 뒤 PCR할 수 있다.

(3) 전기영동장치 (Electrophoresis apparatus)
- 전기영동을 하는 기기로, DNA의 크기가 클수록 느리게 이동하게 되고, 전기장의 방향 또한 이동속도에 영향을 미친다. Agarose gel에 시료를 넣고 전류를 흘려보내면 인산기로 인해 (-)전하를 띄는 DNA는 양극 (+)쪽으로 끌려가게 된다. 이 때 DNA가 통과하는 Agarose gel은 다당류, 다공성 물질이기 때문에..

<중 략>

참고 자료

pET-22b(+) vector Protocol
미생물 실험서/ 유민, 김병오, 이혜영 공저/ p.68-75