결과1_Miniprep A+ 결과레포트

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract

Miniprep은 배양된 세포에 있는 세포벽과 세포막을 부수어 Plasmid DNA를 분리 및 추출하는 방법이다. 이번 실험에서는 alkaline lysis법을 이용하여 대장균 E coli의 Plasmid DNA를 추출하였고, 추출한 DNA의 크기를 전기영동법을 이용하여 측정해보았다.
배양된 E coli를 원심분리 한 후 세포벽을 불안정하게 해주는 S1 Buffer, 세포막을 파괴시키고 DNA를 변성시키는 S2 Buffer, 변성된 DNA를 재생 시켜주는 S3 Buffer, 에탄올이 남아 있는 염들을 씻어내어 DNA의 순도를 높여주는 PW Buffer, spin column으로부터 DNA를 분리하는 EB Buffer를 순서대로 넣어주고 원심분리 시키는 과정을 반복하며 실험을 진행하였다.
이렇게 추출한 Plasmid DNA를 전기영동을 통해 나타난 결과값을 이론적 DNA ladder의 크기와 비교하며 size marker 옆의 band를 확인하였다. 그 결과 약 4.0kbp의 크기를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 이 값을 통해 결과값이 왜 이렇게 나타났는지, 다른 조의 결과값은 왜 서로 다르게 나타났는지를 고찰해보았다.

2. Experiment

1) 시약 및 장치

- 1.5ml microtube
- 원심분리기(Centrifuge)
- Micropipette 1ml, 100μl, 1000μl
- Spin column, collection tube
- Labopass™ miniprep kit
(S1 buffer, S2 buffer, S3 buffer, PW buffer, EB buffer)
- Electrophoresis apparatus
- TAE buffer (1X)
- Electrophoresis agarose
- DNA ladder, DNA loading star(6X)
- UV transilluminator

2) 실험방법

Figure 2. 원심 분리된 E coli
(1) 미리 배양된 세포(E.coli) 1.0ml를 1.5ml micro tube에 넣고, 10분 동안 15,000rpm으로 원심분리를 진행한 후 상등액을 피펫을 이용하여 제거한다.

참고 자료

2020년 4학년 1학기 실험노트
Willey, Sherwood, Woolverton / 2016 / "미생물학 제9판“ / (주)라이프사이언스 / 137~172p, p358~371
오계현 외 4명, 2010, “최신미생물실험”, 신광문화사, 210~217p
유주현, 변유량 / 2007 / “응용미생물학실험” / 도서출판효일 / p211~250
연세대학교 생화학실험.pdf - Plasmid DNA from E.coli