PCR

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract

이번 실험은 DNA 중합 효소를 이용하여 특정 염기 서열을 대량으로 증폭시키는 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 하였다. PCR mixture를 만든 후 PCR Thermocycler에 의해 각 과정 별로 정해진 온도로 가열을 해주어 PCR을 진행하였다. 증폭시킨 DNA를 Agarose gel 전기영동을 통해 확인한다.

2. Experiment

 시약 및 장치
- PCR Machine, Micropipette (10, 20, 100), PCR tube, Plasmid DNA, Nuclease free water, Forward primer, Reverse primer, pfu polymerase
- Electrophoresis agarose, 1kbp DNA ladder, 6X Loading star, UV transilluminator

 실험 방법
① Table 1의 구성으로 PCR mixture를 만든다. 시약은 위에서부터 순서대로 넣어준다.
 DNA template는 지난 실험에서 분리한 Plasmid DNA로 스스로 복제가 가능하다.
 순서대로 넣어 주어야 하는 이유는 Thermocycler에서 반응시키기 전에 반응이 일어나는 것을 막기 위함이다.
② PCR Thermocycler의 온도를 설정하여 PCR을 진행한다.
 PCR thermocycler setting : 94℃ 3min, [94℃ 30sec(Denaturation), 52℃ 30sec (Annealing), 72℃ 1min (Polymerization)]X 11 cycle, 72℃ 5min
③ 전기영동 기기에 Agarose gel을 넣고 1X TAE buffer를 잠길 때까지 채운다.
 TAE buffer는 Tris(양이온을 공급해 –를 띄는 DNA를 끌고감), Acetate(pH를 낮추어 완충역할), EDTA(전기 영동하는 동안 DNA 분해되는 것 막음) 이렇게 3가지 물질이 들어있다.

참고 자료

안영창 외 6명, “등온 증폭법과 Real-time PCR을 이용한 Salmonella 검출”, Journal of the Korean Chemical Society, Vol. 54, No. 2 (2010)
DYNE BIO 연구소 PCR primer design
http://compbio.korea.ac.kr
REECE 외 3명, 2011, “생명과학 개념과 현상의 이해”, PEARSON, p220-221
강종백, 2004, “유전자 클로닝 입문”, 월드사이언스, p69-71
“2019 생물화학공학이론 및 실험” 실험 노트
google 이미지, 위키백과