SDS PAGE와 Western blotting 실험 report

소개글

SDS-PAGE로 Mouse IgG를 크기별로 분리한 뒤, Marker와 비교하여 Ab의 Heavy chain과 Light chain의 크기를 알아본다. 또한 Western blotting을 통한 Ab-Ag specific binding으로 qualitative analysis을 진행한다.

목차

1. 실험목적
2. 이론
3. 실험 시약 조성
4. 실험 순서
5. 결과 및 해석

본문내용

1. 실험목적
SDS-PAGE로 Mouse IgG를 크기별로 분리한 뒤, Marker와 비교하여 Ab의 Heavy chain과 Light chain의 크기를 알아본다. 또한 Western blotting을 통한 Ab-Ag specific binding으로 qualitative analysis을 진행한다.

2. 이론
SDS-PAGE는 SDS의 양 친매성 특성을 이용하여 protein을 검출하는 기본적인 방법이다. SDS는 protein에 이온결합하여 (-)charge를 띄게 해줘서 모든 분자들이 (+)charge으로 이동할 수 있게 해준다. Gel은 Stacking gel과 Running gel로 나누어져 있다. Gel의 pH에 의해 각각 역할이 다르다.

① Stacking gel
Stacking gel에서는 비교하고자 하는 protein들이 같은 출발선에서 위치하도록 하는데 목적이 있다. Glycine ion은 pKa값이 6.2인데 Stacking gel의 경우 pH가 6.8이므로 Cl-와 Glycine간의 이동속도 차이가 생기게 된다. 이때 Cl-, Protein, Glycine은 모두 (-)charge를 띄는데 Cl-는 분자량이 아주 작기 때문에 가장 빨리 내려가게 되고 Glycine은 일부만 (-)charge를 띄기 때문에 이동속도가 가장 느리다. 따라서 이동속도는 Cl->Protein>Glycine의 순서가 된다. Stacking gel 상에서 Cl-와 Glycine간의 이동속도 차이는 두 ion사이에서 발생하는 high voltage gradient의 영향을 받는다. 그리고 Acrylamide의 농도가 낮아 Protein들은 거의 동일한 속도로 내려간다. Protein들은 일직선으로 내려가게 되고 Running gel에 들어가기 전에 같은 출발선 상에 위치하게 된다.

② Running gel
Running gel에서는 Protein의 분자량에 따라 시료간 이동속도의 차이를 보고자 하는데 목적이 있다. Running gel의 pH는 8.8이여서 Glycine은 완전히 이온화 된다.

참고 자료

없음