Western Blotting

소개글

Western Blotting 실험의 목적, 재료, 방법 등이 소개되어 있습니다.

목차

★ Western Blotting
〔1〕실험 목적
〔2〕실험 시료
〔3〕실험 기구
〔4〕실험 방법

본문내용

〔1〕실험 목적
Transfection이 유리한 HEK293 내의 β-actin을 nitrocellulose membrane에 transfer한 후 항원-항체
반응을 통한 Western blotting 방법을 통해 detection하여 가시화 할 수 있다.

〔2〕실험 시료
① RIPA buffer
┌ 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)
├ 150 mM NaCl
├ 1% nonident P-40 + 1 mM DTT
├ 0.5% deoxycholate
└ 10% SDS : Lipid bilayer를 녹여 cell을 깨는 역할.
② 5X protein sample buffer (-20℃)
┌ Tris-Cl (pH 6.8) : gel과 주변 buffer의 pH를 맞추기 위함.
├ Glycerol : 비중을 부여하여 loading한 sample이 가라앉도록 도움.
├ SDS : detergent로 protein을 1차 구조로 풀어주고 coating하는 역할.
└ Bromophenol Blue : dye로써 눈에 보이도록 하는 역할.
③ Running buffer : Tris-glycine electrophoresis buffer (pH 8.3)
┌ 25 mM Tris
├ 250 mM glycine
└ 0.1% SDS
④ Transfer buffer
┌ Tris base 15.6 mM
└ Glycine 120 mM
⑤ Blocking buffer (5% nonfat milk)
┌ PBS/0.1% Tween 20 : 50㎖
└ nonfat milk : 2.5g

참고 자료

없음