Ion exchange chromatography LDH

소개글

Purification of Lactate Dehydrogenase
PartⅡ: Ion Exchange Chromatography

실험 목적
(1) Protein purification
⋅ion exchage chromatography
(2) Determination of enzyme activity
⋅spectrophotometry
⋅protein concentration
⋅LDH activity

목차

실험 목적
이론 (배경지식 및 원리)
실험 결과
실험에 대한 고찰

본문내용

1-1) Ion exchange chromatography

단백질은 구성 아미노산 중에 산성, 염기성 아미노산을 함유하므로 적당한 pH 조건하에서는 양(+)또는 음(-)의 전하를 가지고 있다. column에 전해질의 고분자 물질을 충진제로 넣고 각종 단백질의 전하량과 충진제의 이온 상호작용의 차이에 따라 단백질을 분획하는 방법이 ion-exchange chromatography이다. 음전하를 가져 양이온을 흡착하는 고분자 담체를 cation exchanger,양이온을 가져 음이온을 흡착하는 고분자 담체를 anion exchanger라한다
단백질정제에 흔히 이용되는 cation exchanger는carboxymethylcellulose(CM-cellulose)이며, cellulose의 히드록시기에 carboxymethyl 기가 부과한 구조를 가져 음전하를 띠므로 양전하를 가진 단백질 분자를 흡착한다. 이에 대하여 음이온 교환체로는 diethylaminoethyl cellulose (DEAE-cellulose)가있다. 이것은 cellulose의 히드록시기에 diethylaminoethyl기가 부가된 구조를 가져 양전하를 가진 단백질을 흡착한다. 이러한 이온교환체를 column을 채우면 서로 반대하전을 가지는 단백질로 이동이 정지되어 결합한다. 단백질의 기질간의 화합정도는 pH와 관을 흐르는 용액의 이온의 강도에 의해 좌우되며, 효과적인 분리를 위하여 이런 조건을 다양하게 조절한다.
※ Note
ꋻ단백질 자체의 capacity도 고려해서 ion exchanger를 선택한다.
ꋻBound materials can be eluted by
ⓛchanging pH ②adding competing materials, usually salt
ꋻElution methods
ⓛstepwise gradient of pH and ionic strength
②continuous gradient
gradiation direction을 줄 때, anion exchanger는 pH를 낮춰주고, cationic exchanger 는 pH를 높여준다. salt의 농도는 둘 다 증가시켜줌.

참고 자료

없음