RNA isolation and RT-PCR 역전사

소개글

생화학 실습
RNA isolation and RT-PCR 역전사

목차

1.subject
2.objectives
3.introduction
4.materials and methods
5.results
6.discussion

본문내용

1. Subject - RNA isolation & RT-PCR

2. Purpose - 조직으로부터 추출한 RNA를 RT-PCR을 이용 cDNA를 만들어보고 이 과정에대한 개념과 유용
성에관해 생각해본다.

3. Introdution
○RNA를 연구하는 이유
-세포는 외부의 자극에 따라서 분화하거나 반응을 하게 되어있다.
보통 유전자의 발현(gene expression)이 다르기 때문이며, central dogma에 의해서 mRNA가 다라진다
그래서 특정 mRNA의 양이나 구조를 분석하는 것이 유용하다는 것이다.

하지만 total RNA를 분리해서 전기영동해보면 위 사진과 같이 차이가 없다. 이는 위 그림과 같이 우리가 관심있는 mRNA는 total RNA의 극히 일부에 지나지 않기 때문이다

-전체 RNA의 1% 정도만이 mRNA인데다가 우리가 관심있는 특정 mRNA는 그 중에서도 극히 일부이다. 따라서 total RNA로부터 어떻게 하면 특정 mRNA의 차이를 알아낼 수 있을까 하는 것이 중요한 문제이다. 이 목적으로 쓰는 실험은 크게 3가지로 나눌 수 있다.

1. Northern blot hybridization
2. RNase protection assay (RPA)
3. RT-PCR

이중 이번실험에서는 RT-PCR을 사용하였다.
RT-PCR은 사실 RNA로부터 cDNA를 만들어 cloning하는 쪽으로 더 많이 쓰는 방법이다. 정량도 가능하지만 (이럴 때는 semi-quantitative RT-PCR이라고 한다) 사실 오차의 소지가 많아서 사람들이 잘 믿어주지 않을 때가 많다.
RT-PCR의 개념만 살펴본다면 위에서 우리가 관심있는 mRNA가 차지하는 비율이 극히 일부라는 것을 보았다. 그러므로 이 mRNA를 증폭해서 그것을 눈으로 확인할 정도로 만들어 주는 것이다.
아래그림에서 보듯이 total RNA는 두 그룹이 같아보이지만 실제로 증폭해서 보면 처음에 1만큼 있었던 것은 100이 된다 할 때 처음 100이 있었던 것은 10000이 되는 원리를 이용하는 것이다.

참고 자료

없음